| 简写说明 | 第1-12页 |
| 图表目录 | 第12-15页 |
| 第1章 引言 | 第15-42页 |
| 1. 环境污染、芳香烃污染与微生物降解 | 第16-18页 |
| ·环境污染、芳香烃污染与毒害作用 | 第16-17页 |
| ·芳香烃污染物的微生物降解 | 第17-18页 |
| ·芳香烃污染物生物治理 | 第18页 |
| 2. 硝基芳香烃生物降解研究进展 | 第18-36页 |
| ·降解硝基芳香烃的微生物 | 第19页 |
| ·降解硝基芳香烃的初始代谢途径 | 第19-27页 |
| ·氧化代谢途径 | 第19-23页 |
| ·还原代谢途径 | 第23-27页 |
| ·硝基芳香烃降解的开环步骤 | 第27-36页 |
| ·邻位开环途径 | 第27-30页 |
| ·间位开环途径 | 第30-36页 |
| 3 氯代芳香烃化合物生物降解的研究进展 | 第36-40页 |
| ·氯代芳香烃污染与毒性 | 第37页 |
| ·氯代芳香烃的有氧脱氯 | 第37-39页 |
| ·氯代芳香烃的厌氧脱氯 | 第39-40页 |
| 4 本研究背景、目的及意义 | 第40-42页 |
| 第2章：Pseudomonas putida ZWL73 降解4-氯硝基苯的基本特性 | 第42-50页 |
| ·材料与方法 | 第42-44页 |
| ·菌株及培养方法 | 第42-43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·降解菌细胞提取物（粗酶）的制备 | 第43页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第43-44页 |
| ·硝基还原酶活性测定 | 第44页 |
| ·开环酶2-氨基5-氯酚1,6-双加氧酶（2A5CPDO）活性测定 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-49页 |
| ·ZWL73 的硝基还原酶活性及其与4CNB 代谢的关系 | 第44-46页 |
| ·ZWL73 的2A5CPDO 活性及与4CNB 代谢的关系 | 第46-48页 |
| ·ZWL73 降解4CNB 的部分还原途径 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| 第3章：硝基还原酶及开环酶基因在P. Putida ZWL73 中的定位 | 第50-59页 |
| ·材料与方法 | 第51-53页 |
| ·菌株及培养方法 | 第51-52页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·质粒消除 | 第52-53页 |
| ·质粒消除菌利用4CNB 的生长能力检测 | 第53页 |
| ·对质粒消除菌的硝基还原酶及开环酶基因的PCR 检测 | 第53页 |
| ·质粒消除菌酶液制备及酶活检测 | 第53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-58页 |
| ·质粒消除菌的获得 | 第53-54页 |
| ·硝基还原酶及开环酶基因的PCR 检测 | 第54-58页 |
| ·质粒消除菌的酶活 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 第4章：P. Putida ZWL73 质粒文库的构建、开环酶基因克隆的筛选 | 第59-73页 |
| ·材料与方法： | 第61-66页 |
| ·菌株和质粒 | 第61-62页 |
| ·试剂 | 第62页 |
| ·质粒DNA 文库的构建 | 第62-65页 |
| ·开环酶基因克隆的筛选 | 第65-66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-72页 |
| ·质粒文库的构建 | 第66-71页 |
| ·开环酶基因的克隆 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 第5章：P. Putida ZWL73 开环酶基因的亚克隆、测序和序列分析 | 第73-90页 |
| ·材料与方法 | 第73-76页 |
| ·菌株和质粒 | 第73-74页 |
| ·试剂 | 第74页 |
| ·常用分子生物学技术 | 第74-75页 |
| ·酶蛋白的诱导表达及粗酶制备 | 第75页 |
| ·亚克隆的开环双加氧酶活性测定 | 第75-76页 |
| ·测序及基因功能分析 | 第76页 |
| ·间位开环双加氧酶进化分析 | 第76页 |
| ·结果与分析 | 第76-80页 |
| ·开环双加氧酶基因的亚克隆 | 第76-77页 |
| ·测序及基因功能分析 | 第77-80页 |
| ·间位开环双加氧酶进化关系 | 第80页 |
| ·讨论 | 第80-90页 |
| 第6章：P. putida ZWL73 的2A5CPDO 过量表达和酶学特性研究 | 第90-99页 |
| ·材料与方法 | 第90-93页 |
| ·菌株与质粒 | 第90-91页 |
| ·试剂 | 第91页 |
| ·表达中间载体的构建 | 第91-92页 |
| ·重组表达载体pZWZD3 的构建 | 第92页 |
| ·CnbCaCb 蛋白诱导表达 | 第92页 |
| ·SDS-PAGE | 第92页 |
| ·2A5CPDO 对不同底物活性的测定 | 第92-93页 |
| ·K_m 值测定 | 第93页 |
| ·结果与分析 | 第93-98页 |
| ·2A5CPDO 在T7 启动子下的过量表达 | 第93-94页 |
| ·2A5CPDO 对不同底物活性 | 第94-97页 |
| ·2A5CPDO 的天然底物 | 第97-98页 |
| ·讨论 | 第98-99页 |
| 第7章：P. putida ZWL73 的2A5CPDO 催化亚基保守活性位点突变研究 | 第99-109页 |
| ·材料与方法 | 第99-103页 |
| ·菌株与质粒 | 第99-100页 |
| ·试剂 | 第100页 |
| ·Overlap Extension PCR 构建突变蛋白的重组表达载体 | 第100-102页 |
| ·突变蛋白的表达 | 第102页 |
| ·突变蛋白的酶活测定 | 第102-103页 |
| ·蛋白二级结构分析 | 第103页 |
| ·结果与分析 | 第103-106页 |
| ·活性中心His 残基分析 | 第103页 |
| ·定点突变载体的构建及蛋白表达 | 第103-104页 |
| ·酶活测定及分析 | 第104-106页 |
| ·突变蛋白二级结构分析 | 第106页 |
| ·讨论 | 第106-109页 |
| 第8 章：结论及后续工作设想 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-123页 |
| 发表及待发表文章 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
