| 第一章 前言 | 第1-19页 |
| 1 谷胱甘肽过氧化物酶(GPX) | 第8-12页 |
| ·GPX 的结构 | 第8-9页 |
| ·GPX 的催化机制 | 第9-11页 |
| ·GPX 的生物学效应 | 第11-12页 |
| 2 GPX 的人工模拟 | 第12-15页 |
| ·Ebselen 及其衍生物 | 第12-13页 |
| ·硒代谷胱甘肽(GSeH) | 第13页 |
| ·硒化环糊精 | 第13页 |
| ·硒化枯草杆菌蛋白酶 | 第13-14页 |
| ·含硒抗体酶 | 第14-15页 |
| 3 人源化抗体 | 第15-17页 |
| ·单克隆抗体 | 第15页 |
| ·HAMA 反应 | 第15-16页 |
| ·人源化抗体 | 第16-17页 |
| 4 定点突变 | 第17-18页 |
| 5 本文立题依据 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-39页 |
| 1 材料 | 第19-20页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·溶液配制 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-39页 |
| ·ScFv 的定点突变 | 第20-27页 |
| ·轻链,重链的定点突变 | 第20-25页 |
| ·重叠 PCR 突变 VL | 第21-24页 |
| ·重叠 PCR 突变 VH | 第24-25页 |
| ·ScFv 的合成 | 第25-27页 |
| ·轻、重链全长基因的酶切 | 第25-26页 |
| ·重链与 Linker 的重叠 PCR 连接、扩增 | 第26-27页 |
| ·重链-Linker 与轻链连接成 ScFv | 第27页 |
| ·工程菌株的构建 | 第27-31页 |
| ·ScFv 克隆于pGEM-T Easy 载体 | 第27-29页 |
| ·表达菌株的构建 | 第29-31页 |
| ·单链抗体的表达与纯化 | 第31-36页 |
| ·全菌 SDS-PAGE 蛋白电泳鉴定表达的单链抗体 | 第31-32页 |
| ·表达条件的优化 | 第32-35页 |
| ·单链抗体的分离纯化 | 第35页 |
| ·表达产物的鉴定(Western Blotting) | 第35-36页 |
| ·单链抗体酶的制备及酶学性质 | 第36-39页 |
| ·单链抗体的硒化 | 第36-37页 |
| ·过氧化氢浓度的测定 | 第37页 |
| ·GPX 活力测定 | 第37-38页 |
| ·硒含量的测定 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第39-58页 |
| 1. ScFv 定点突变 | 第39-45页 |
| ·重叠 PCR 法对 V_L,V_H的定点突变 | 第39-41页 |
| ·ScFv 的合成 | 第41-45页 |
| 2. 工程菌株的构建 | 第45-47页 |
| ·ScFv 克隆pGEM-T Easy 载体 | 第45-46页 |
| ·表达菌株的构建 | 第46-47页 |
| 3. 单链抗体的表达与纯化 | 第47-55页 |
| ·ScFv 的表达及表达条件的优化 | 第47-52页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第52-54页 |
| ·CM Sepharose Fast Flow 离子交换层析 | 第52-53页 |
| ·Chelating Sepharose Fast Flow 金属螯合层析 | 第53-54页 |
| ·单链抗体的蛋白印迹鉴定(Western Blotting) | 第54-55页 |
| ·单链抗体的回收率 | 第55页 |
| 4. 单链抗体的化学突变 | 第55-56页 |
| 5. 讨论 | 第56-58页 |
| ·利用重叠 PCR 的方法进行定点突变 | 第56-57页 |
| ·单链抗体的可溶性表达 | 第57-58页 |
| 小结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 附表 | 第63-65页 |
| 中文摘要 | 第65-67页 |
| ABSTRACT | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
