| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-20页 |
| ·苏云金芽孢杆菌概述 | 第8-9页 |
| ·苏云金芽保杆菌研究简史 | 第8-9页 |
| ·苏云金芽孢杆菌的杀虫毒素 | 第9-11页 |
| ·苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的形态与生物活性 | 第9-10页 |
| ·苏云金芽孢杆菌δ-内毒素的种类、分子结构及其功能 | 第10页 |
| ·苏云金芽孢杆菌δ-内毒素杀虫作用机制 | 第10-11页 |
| ·苏云金芽孢杆菌cry 基因 | 第11-13页 |
| ·苏云金芽孢杆菌cry 基因的分类 | 第11-13页 |
| ·cry 基因的存在模式 | 第13页 |
| ·Bt 杀虫晶体蛋白的结构和功能 | 第13-17页 |
| ·Bt 杀虫晶体蛋白的结构 | 第13-14页 |
| ·Bt 杀虫晶体蛋白的作用机理 | 第14-15页 |
| ·Bt 杀虫晶体蛋白结构与功能的关系 | 第15-17页 |
| ·Bt 杀虫晶体蛋白的基因工程 | 第17-18页 |
| ·苏云金芽孢杆菌基因克隆的意义 | 第18-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-29页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20-22页 |
| ·试验方法 | 第22-29页 |
| ·苏云金杆菌DNA 模板的制备 | 第22页 |
| ·DNA 的PCR 扩增 | 第22-23页 |
| ·PCR 产物与T 载体的连接 | 第23-24页 |
| ·感受态细胞的制备（CaCl_2 法） | 第24页 |
| ·转化 | 第24页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第24页 |
| ·序列测定及分析 | 第24-25页 |
| ·E.coli 质粒的提取 | 第25页 |
| ·BamHI，HindШ双酶切 | 第25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳回收 | 第25-26页 |
| ·T4 DNA-lignase 连接 | 第26页 |
| ·pET28a(+)-cry2Ad2 表达载体的鉴定 | 第26页 |
| ·目的基因的诱导表达及优化 | 第26页 |
| ·蛋白质的SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第27页 |
| ·生物测定 | 第27-29页 |
| 第三章 结果与分析 | 第29-40页 |
| ·苏云金杆菌质粒DNA 提取样品的检测 | 第29页 |
| ·Bt 菌株S249 中的cry2Ad2 基因的克隆及序列测定 | 第29-35页 |
| ·利用P_1P_2 引物对进行PCR 扩增及其产物的克隆 | 第29页 |
| ·利用P_3P_4 引物对进行长片段PCR 扩增及其产物的克隆 | 第29-32页 |
| ·新cry2Ad2 基因的全序列 | 第32-35页 |
| ·cry2Ad2 基因在E.coli 中的表达 | 第35-38页 |
| ·pET28a(+)-cry2Ad2 重组体的构建和鉴定 | 第35页 |
| ·cry2Ad2 基因的诱导表达及优化 | 第35-37页 |
| ·蛋白浓度测定结果 | 第37-38页 |
| ·生物测定结果 | 第38-40页 |
| 第四章 讨论 | 第40-42页 |
| ·Bt-cry 全长基因PCR 扩增 | 第40页 |
| ·cry2Ad2 全长基因的克隆及序列分析 | 第40页 |
| ·cry2Ad2 基因的表达 | 第40-41页 |
| ·研究展望 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 作者简介 | 第49页 |
