| 摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-25页 |
| 1．1 CPV的研究概况 | 第13-18页 |
| 1．1．1 羊痘病的发病概况 | 第13页 |
| 1．1．2 CPV的基本特征 | 第13-15页 |
| 1．1．3 CPV的基因组结构 | 第15-16页 |
| 1．1．4 CPV各毒株之间的关系 | 第16-17页 |
| 1．1．5 CPV的诊断方法 | 第17-18页 |
| 1．2 与 CPV毒力相关的蛋白及其功能 | 第18-21页 |
| 1．2．1 核苷酸还原酶 | 第19页 |
| 1．2．2 胸腺嘧啶核苷激酶 | 第19-20页 |
| 1．2．3 囊膜蛋白 | 第20-21页 |
| 1．3 CPV疫苗的研究概况 | 第21-23页 |
| 1．3．1 CPV传统疫苗 | 第21页 |
| 1．3．2 亚单位疫苗 | 第21-22页 |
| 1．3．3 新型CPV基因缺失疫苗 | 第22-23页 |
| 1．4 基因缺失CPV重组病毒的构建及筛选策略 | 第23-24页 |
| 1．4．1 构建重组 CPV的基本原理 | 第23页 |
| 1．4．2 转移载体的基本元件 | 第23-24页 |
| 1．5 研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 2 材料和方法 | 第25-45页 |
| 2．1 材料 | 第25-28页 |
| 2．1．1 病毒与细胞 | 第25页 |
| 2．1．2 质粒与菌种 | 第25页 |
| 2．1．3 基因组信息来源 | 第25页 |
| 2．1．4 引物 | 第25-27页 |
| 2．1．5 细胞培养基的制备 | 第27页 |
| 2．1．6 试剂 | 第27页 |
| 2．1．7 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2．2 实验方法 | 第28-45页 |
| 2．2．1 羊胎皮肤细胞的制备 | 第28页 |
| 2．2．2 GTPV-TY株的培养与病毒 DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2．2．3 TK基因的克隆和序列测定 | 第29-31页 |
| 2．2．4 P32基因的克隆和序列测定 | 第31-32页 |
| 2．2．5 LacZ基因转移载体pCMV-LacZ的构建 | 第32-34页 |
| 2．2．6 带有LacZ基因的GTPV TK基因缺失载体的构建 | 第34-38页 |
| 2．2．7 带有LacZ基因的GTPV P32基因缺失载体的构建 | 第38-42页 |
| 2．2．8 表达LacZ基因的TK~-GTPV-TY毒株的筛选和鉴定 | 第42-45页 |
| 3 结果 | 第45-58页 |
| 3．1 GTPV-TY株的培养 | 第45页 |
| 3．2 GTPV-TY株TK基因的序列测定分析 | 第45-46页 |
| 3．2．1 GTPV-TY株TK基因的克隆 | 第45-46页 |
| 3．2．2 GTPV-TY株TK基因序列测定 | 第46页 |
| 3．2．3 TK基因同源性比较 | 第46页 |
| 3．3 GTPV-TY株P32基因的序列测定分析 | 第46-47页 |
| 3．3．1 GTPV-TY株P32基因的克隆 | 第46-47页 |
| 3．3．2 GTPV-TY株P32基因序列测定 | 第47页 |
| 3．3．3 P32基因同源性比较 | 第47页 |
| 3．4 LacZ基因转移载体的构建 | 第47-49页 |
| 3．4．1 Pcmv序列的克隆 | 第47-48页 |
| 3．4．2 重组载体pCMV-LacZ的构建 | 第48-49页 |
| 3．5 带有LacZ基因的GTPV TK基因缺失载体的构建 | 第49-52页 |
| 3．5．1 重组臂的克隆 | 第49-50页 |
| 3．5．2 TK基因缺失载体pdTK的构建 | 第50-52页 |
| 3．5．3 表达LacZ基因的重组载体的构建 | 第52页 |
| 3．6 带有LacZ基因的GTPV P32基因缺失载体的构建 | 第52-55页 |
| 3．6．1 重组臂的克隆 | 第52-53页 |
| 3．6．2 P32基因缺失载体pdP32的构建 | 第53-55页 |
| 3．6．3 表达LacZ基因的重组载体的构建 | 第55页 |
| 3．7 表达LacZ基因的GTPV TK~-毒株的筛选和鉴定 | 第55-58页 |
| 3．7．1 病毒的筛选和纯化 | 第55-57页 |
| 3．7．2 重组病毒的PCR鉴定 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-63页 |
| 4．1 GTPV-TY株的培养 | 第58页 |
| 4．2 GTPV-TY株的TK基因 | 第58-59页 |
| 4．3 TK基因缺失转移载体的构建 | 第59-60页 |
| 4．4 GTPV-TY株的P32基因 | 第60-61页 |
| 4．5 P32基因缺失转移载体的构建 | 第61页 |
| 4．6 TK基因缺失GTPV-TY重组病毒的构建和筛选 | 第61-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 附录 | 第72-88页 |
| 附录A 本文使用的缩写 | 第72-73页 |
| 附录B 本实验获得的GTPV-TY株TK基因序列 | 第73-75页 |
| 附录C GTPV-TY TK基因同其它痘病毒TK基因的核苷酸序列比较 | 第75-77页 |
| 附录D GTPV-TY TK基因同其它痘病毒TK基因的氨基酸序列比较 | 第77-78页 |
| 附录E 本实验获得的GTPV-TY株P32基因序列 | 第78-80页 |
| 附录F GTPV-TY P32基因与其它痘病毒H3L基因的核苷酸序列比较 | 第80-84页 |
| 附录G GTPV-TY P32基因与其它痘病毒H3L基因的氨基酸序列比较 | 第84-86页 |
| 附录H pCMV测序结果 | 第86-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第88页 |
