| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-9页 |
| 引言 | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-31页 |
| 一、猴/免疫缺陷嵌合病毒(SHIV)研究进展 | 第12-24页 |
| 1.HIV和SIV | 第12-14页 |
| 2.构建嵌合病毒的策略： | 第14-16页 |
| 3.SHIV的生物学特点： | 第16-20页 |
| 4.SHIV的作用： | 第20-24页 |
| 二、艾滋病疫苗的研究进展： | 第24-31页 |
| 1.减毒活疫苗： | 第25页 |
| 2.基因工程亚单位疫苗： | 第25-26页 |
| 3.核酸疫苗： | 第26-27页 |
| 4.活病毒载体疫苗： | 第27-31页 |
| 第二章 实验研究 | 第31-93页 |
| 一、针对HIV-1B’亚型首株SHIV的构建 | 第31-68页 |
| ·实验材料和方法 | 第31-53页 |
| ·实验仪器、试剂和耗材 | 第31-35页 |
| ·实验仪器 | 第31-32页 |
| ·实验试剂、耗材 | 第32-35页 |
| ·缓冲液及溶液、培养基配方： | 第35-39页 |
| ·溶液的配制： | 第35-39页 |
| ·实验方法 | 第39-53页 |
| ·PCR扩增env片断 | 第39-40页 |
| ·PCR产物(env)的快速回收和纯化(上海华舜生物工程有限公司) | 第40页 |
| ·酶切回收的PCR产物(env)和载体 | 第40页 |
| ·酶切产物的回收(Qiaquick Extraction kit回收) | 第40-41页 |
| ·载体去磷酸化及纯化 | 第41页 |
| ·外源片断(env)克隆到载体 | 第41页 |
| ·酶切鉴定克隆： | 第41-42页 |
| ·菌种的培养和保藏 | 第42页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第42-43页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| ·质粒的转化 | 第44页 |
| ·序列的测定 | 第44页 |
| ·遗传分析 | 第44页 |
| ·细胞转染 | 第44-45页 |
| ·细胞融合实验 | 第45页 |
| ·嵌合病毒SHIV的构建 | 第45-46页 |
| ·传代细胞的培养冻存和复苏 | 第46-47页 |
| ·外周血单核细胞(PBMC)的分离与培养 | 第47页 |
| ·SHIV感染PBMC | 第47-48页 |
| ·使用p27抗原ELISA检测和定量病毒 | 第48-49页 |
| ·从感染SHIV的PBMC提取病毒RNA | 第49-50页 |
| ·基于TZM-b1细胞的荧光素酶反应测定SHIV病毒感染性 | 第50页 |
| ·SHIV-B’_(WHU)感染GHOST.CD4.CCR5/CXCR4细胞 | 第50页 |
| ·逆转录反应(RT Reaction) | 第50-51页 |
| ·PCR扩增cDNA rev片断 | 第51-53页 |
| ·实验结果 | 第53-64页 |
| ·HIV-1 tat/rev/vpu/env基因PCR扩增、克隆、测序 | 第53页 |
| ·HIV-1B’tat/rev/vpu/env片断序列分析 | 第53-58页 |
| ·用于构建SHIV的HIV-1B’亚型env的表型特征 | 第58页 |
| ·构建具有复制能力的SHIV-B’_(WHU) | 第58-61页 |
| ·SHIV-B’_(WHU)的侵染性和复制能力 | 第61-62页 |
| ·SHIV-B’_(WHU)在人和中国恒河猴PBMC上的复制能力 | 第62-64页 |
| ·讨论 | 第64-68页 |
| 二、针对HIV-1B’亚型，以高度减毒痘苗病毒天坛株为载体HIV-1疫苗的构建 | 第68-92页 |
| ·实验材料和方法 | 第68-77页 |
| ·实验仪器、试剂和耗材 | 第68页 |
| ·缓冲液及溶液、培养基配方：见1.1.2. | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-77页 |
| ·穿梭载体的制备 | 第68-69页 |
| ·同源重组及重组病毒的单斑筛选、纯化和鉴定 | 第69-70页 |
| ·活细胞免疫染色法对重组病毒筛选和纯化 | 第70页 |
| ·病毒在vero细胞中增殖 | 第70-71页 |
| ·病毒的纯化 | 第71页 |
| ·病毒滴度(Titer)的测定 | 第71页 |
| ·免疫染色 | 第71-72页 |
| ·真核表达gp120蛋白 | 第72-73页 |
| ·蛋白质凝胶电泳和免疫印迹(Western Blot) | 第73-74页 |
| ·电镜观察HIV病毒样颗粒的形成 | 第74-75页 |
| ·HIV阳性血清体外灭活 | 第75页 |
| ·重组病毒免疫小鼠 | 第75页 |
| ·ELISA检测小鼠抗体 | 第75-77页 |
| ·实验结果 | 第77-89页 |
| ·HIV-1B’_(WHU)env和gagpol基因PCR扩增、克隆、测序及分析 | 第77页 |
| ·各种穿梭载体的制备 | 第77-80页 |
| ·三种重组痘苗病毒的构建 | 第80页 |
| ·纯化重组病毒的鉴定 | 第80-81页 |
| ·重组痘苗病毒表达蛋白鉴定 | 第81-86页 |
| ·重组病毒表达的gag蛋白的自我装配 | 第86页 |
| ·gp120在真核表达载体上的蛋白表达 | 第86页 |
| ·重组病毒增殖和滴度的测定 | 第86-88页 |
| ·重组痘苗病毒的体内毒力 | 第88页 |
| ·重组痘苗病毒的免疫原性 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-92页 |
| 三、总结 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-105页 |
| 博士期间已发表和待发表论文及获奖情况 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
