| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-18页 |
| ·植物抗逆基因工程研究 | 第9-12页 |
| ·耐盐机制及相关基因工程进展 | 第9-10页 |
| ·抗冻机制及相关基因工程进展 | 第10-11页 |
| ·抗氧化及相关基因工程进展 | 第11-12页 |
| ·用于提高植抗非生物逆境胁迫能力的基因 | 第12页 |
| ·甘油与植物抗逆的研究进展 | 第12页 |
| ·植物基因工程育种 | 第12-15页 |
| ·植物基因转化技术 | 第13-14页 |
| ·植物基因转化的受体系统 | 第14-15页 |
| ·甘油的特点及甘油代谢 | 第15-16页 |
| ·甘油与甘油的特点 | 第15页 |
| ·甘油的合成 | 第15-16页 |
| ·立题背景及本文的研究任务 | 第16-18页 |
| 第二章 产甘油假丝酵母产甘油关键基因GPD、GPP 的克隆及序列分析 | 第18-26页 |
| ·材料和方法 | 第18-21页 |
| ·菌株 | 第18页 |
| ·酶和试剂 | 第18-19页 |
| ·产甘油假丝酵母染色体DNA 的制备 | 第19页 |
| ·PCR 引物 | 第19页 |
| ·PCR 扩增反应体系及反应条件 | 第19-20页 |
| ·PCR 产物胶回收 | 第20页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第20页 |
| ·GPD、GPP 与pEGM-T-Easy vector 连接 | 第20页 |
| ·转化 | 第20页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第20-21页 |
| ·转化子的筛选鉴定 | 第21页 |
| ·GPD、GPP 的测序 | 第21页 |
| ·结果 | 第21-25页 |
| ·GPD、GPP 基因的扩增与重组质粒的鉴定 | 第21-22页 |
| ·GPD、GPP 基因的测序结果 | 第22-25页 |
| ·小结 | 第25-26页 |
| 第三章 产甘油假丝酵母产甘油关键基因GPD、GPP 在酿酒酵母中的表达 | 第26-34页 |
| ·材料与方法 | 第26-30页 |
| ·菌种和质粒 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·工具酶 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第27页 |
| ·转化子的筛选鉴定 | 第27页 |
| ·酿酒酵母的高效转化 | 第27-28页 |
| ·酵母质粒的提取方法 | 第28-29页 |
| ·甘油测定方法 | 第29-30页 |
| ·菌体干重测定 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-34页 |
| ·pYX212-GPD 和pYX212-GPP 的构建 | 第30页 |
| ·表达载体pYX212-GPD 和pYX212-GPP 的酶切验证 | 第30页 |
| ·对发酵液中甘油累积及生物量的影响 | 第30-34页 |
| 第四章 产甘油假丝酵母产甘油关键酶基因GPD、GPP 的植物表达载体的构建 | 第34-43页 |
| ·材料与方法 | 第34-36页 |
| ·菌种和质粒 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34-35页 |
| ·工具酶 | 第35页 |
| ·PCR 引物 | 第35页 |
| ·PCR 扩增反应体系及反应条件 | 第35页 |
| ·PCR 产物胶回收 | 第35页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第35页 |
| ·A.tumefaciens LBA4404 感受态的制备 | 第35-36页 |
| ·电击转化A. tumefaciens LBA4404 | 第36页 |
| ·A. tumefaciens LBA4404 的质粒提取 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-42页 |
| ·p81121-GPD 和p81121-GPP 的构建 | 第36-37页 |
| ·pCAMBIA3300-GPD 和pCAMBIA3300-GPP 的构建 | 第37-40页 |
| ·pEGM-T-Easy-CaMV 355-GPP-Tnos 和pCAMBIA3300-GPD-GPP 的构建 | 第40-41页 |
| ·电击转化A. tumefaciens LBA4404 | 第41-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 第五章 利用根癌农杆菌L84404 将GPD、GPP 转化烟草NC89 及转基因植物鉴定方法的建立 | 第43-50页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·烟草 | 第43页 |
| ·转基因植物样品 | 第43页 |
| ·菌种 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| ·主要生化试剂 | 第44页 |
| ·PCR 引物 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-45页 |
| ·外植体的获取 | 第44页 |
| ·重组A.tumefaciens L84404 的活化 | 第44页 |
| ·共培养 | 第44-45页 |
| ·再生筛选培养 | 第45页 |
| ·生根培养 | 第45页 |
| ·转基因植物的快速PCR 鉴定 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-48页 |
| ·抗性烟草的筛选 | 第45页 |
| ·染色体DNA 的提取 | 第45-46页 |
| ·转基因烟草PCR 鉴定结果 | 第46-48页 |
| ·转基因植物的快速PCR 鉴定方法的准确性检验结果 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-50页 |
| 主要结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 硕士研究生期间发表的论文 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
