| 目录 | 第1-7页 |
| 缩略语表 | 第7-10页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| 英文摘要 | 第13-17页 |
| 前言 | 第17-24页 |
| 1.骨肉瘤基因治疗的现状及存在问题 | 第17-19页 |
| (1) 骨钙素启动子在骨肉瘤基因治疗中的应用及存在问题 | 第17-18页 |
| (2) hTERT启动子在骨肉瘤基因治疗中的应用及存在问题 | 第18页 |
| (3) 双重靶向转录策略的实现及存在问题 | 第18-19页 |
| 2.双重转录靶向定位表达长双链RNA策略的提出和理论依据 | 第19-24页 |
| (1) 双重转录靶向定位表达长dsRNA策略的构思 | 第19-20页 |
| (2) 双重转录靶向定位表达长dsRNA策略的理论依据 | 第20-22页 |
| (3) 双重转录靶向定位表达长dsRNA策略的优越性 | 第22-24页 |
| 文献回顾 | 第24-40页 |
| RNA干扰的研究进展 | 第24-40页 |
| 一、RNA干扰的发现及研究历程 | 第24-25页 |
| 二、RNA干扰的作用机制——在多个水平发挥基因剔除作用 | 第25-26页 |
| 三、实现RNA干扰的方法 | 第26-30页 |
| (一) 体外合成siRNA或shRNA | 第26页 |
| (二) 细胞内合成siRNA或shRNA | 第26-27页 |
| (三) siRNA表达载体的选择 | 第27-29页 |
| (四) 将siRNA导入细胞的方法 | 第29-30页 |
| 四、条件性RNA干扰的实现 | 第30-35页 |
| (一) 利用PolⅢ启动子实现条件性RNA干扰 | 第30-34页 |
| (二) 利用PolⅡ启动子实现条件性RNA干扰 | 第34-35页 |
| 五、RNA干扰的靶向性 | 第35-37页 |
| (一) 靶向作用 | 第35-36页 |
| (二) 靶向转染和靶向转导 | 第36页 |
| (三) 靶向转录 | 第36-37页 |
| 六、RNA干扰技术在基因治疗领域的应用 | 第37-38页 |
| (一) 治疗肿瘤和遗传性疾病 | 第37-38页 |
| (二) 治疗病毒性传染病 | 第38页 |
| (三) 治疗其他疾病 | 第38页 |
| 七、RNA干扰技术的缺点和不足 | 第38-40页 |
| (一) 脱靶效应 | 第38-39页 |
| (二) 激活PKR和2’5’-OAS依赖的信号转导通路 | 第39页 |
| (三) 其它不足之处 | 第39-40页 |
| 正文 | 第40-89页 |
| 1 组织特异性RNA干扰技术平台的建立 | 第40-67页 |
| ·引言 | 第40页 |
| ·材料和方法 | 第40-54页 |
| ·材料 | 第40-42页 |
| ·方法 | 第42-54页 |
| ·结果 | 第54-63页 |
| ·自行设计的mini-polyA测序结果 | 第54页 |
| ·质粒pGL3-shLuc和pGL3-shP53的鉴定 | 第54-56页 |
| ·人骨钙素启动子的克隆和pGL3-OCP-shLuc的鉴定 | 第56-58页 |
| ·hTERT核心启动子PCR产物的琼脂糖凝胶电泳结果 | 第58-61页 |
| ·pGL3-OCP-shLuc对虫荧光素酶表达的抑制作用 | 第61-62页 |
| ·pGL3-hTERT-shLuc对虫荧光素酶表达的抑制作用 | 第62页 |
| ·pGL3-hTERT-shP53对P53表达的抑制作用 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-66页 |
| ·结论 | 第66-67页 |
| 2 靶向表达长双链RNA诱导骨肉瘤细胞凋亡 | 第67-89页 |
| ·引言 | 第67页 |
| ·材料和方法 | 第67-78页 |
| ·材料 | 第67-68页 |
| ·方法 | 第68-78页 |
| ·结果 | 第78-85页 |
| ·pGL3-hTERT-PP1和pGL3-OCP-PP2的双酶切鉴定 | 第78页 |
| ·穿梭质粒pDC311-hTERT-PP1的鉴定 | 第78-79页 |
| ·穿梭质粒pDC311-dsRNA的鉴定 | 第79-80页 |
| ·Ad-dsRNA的鉴定 | 第80页 |
| ·Ad-dsRNA滴度测定 | 第80-81页 |
| ·MTT实验 | 第81页 |
| ·Annexin V-FITC结合实验 | 第81-82页 |
| ·PARP切割 | 第82-83页 |
| ·PKR激活和eIF2α磷酸化的测定 | 第83页 |
| ·Caspase-3和caspase-8活性检测 | 第83-85页 |
| ·讨论 | 第85-88页 |
| ·结论 | 第88-89页 |
| 小结 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-106页 |
| 个人简历及研究成果 | 第106-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
