| 摘要 | 第1-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-29页 |
| 1 乳铁蛋白研究进展 | 第12-18页 |
| ·乳铁蛋白的分布与结构 | 第12-14页 |
| ·乳铁蛋白的分布 | 第12-13页 |
| ·乳铁蛋白的结构 | 第13-14页 |
| ·乳铁蛋白的一级结构保守性与功能关系 | 第14-15页 |
| ·乳铁蛋白的生物学功能 | 第15-17页 |
| ·抑菌和杀菌作用 | 第15-16页 |
| ·抗病毒作用 | 第16页 |
| ·参与机体免疫调节 | 第16页 |
| ·促进机体对Fe~3+的吸收避免刺激肠胃 | 第16-17页 |
| ·乳铁蛋白参与基因转录调节 | 第17页 |
| ·阻断脂肪氧化 | 第17页 |
| ·促进肠道内有益微生物的生长,调整肠道菌群 | 第17页 |
| ·抗癌作用 | 第17页 |
| ·乳铁蛋白的应用 | 第17-18页 |
| 2 胸腺肽α1研究进展 | 第18-20页 |
| ·Tα1 的分布 | 第18-19页 |
| ·Tα1 的理化特点 | 第19页 |
| ·Tα1 的生物学功能 | 第19-20页 |
| ·Tα1 的应用 | 第20页 |
| 3 人乳铁蛋白与胸腺肽的异源表达系统的进展 | 第20-24页 |
| ·乳铁蛋白异源表达系统的研究 | 第20-23页 |
| ·微生物发酵或动物细胞组织培养 | 第20-21页 |
| ·转基因植物表达系统 | 第21-22页 |
| ·转基因动物乳腺表达系统 | 第22-23页 |
| ·胸腺肽α1 异源表达系统研究进展 | 第23-24页 |
| 4 透明颤菌血红蛋白研究进展 | 第24-27页 |
| ·VHb 结构 | 第24-26页 |
| ·VHb 的生理特点及生理功能 | 第26页 |
| ·VHb 的作用机理 | 第26-27页 |
| ·VHb 的应用 | 第27页 |
| ·VHb 与微生物基因工程 | 第27页 |
| ·VHb 与植物基因工程 | 第27页 |
| 5 研究目的与意义 | 第27-29页 |
| 第二章 人乳铁蛋白基因合成及人乳铁蛋白胸腺肽融合基因的研制 | 第29-44页 |
| 1 实验材料 | 第29-30页 |
| ·菌株 | 第29页 |
| ·有关的质粒 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·人工合成的寡核苷酸片段 | 第29-30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·Tα1hLf 融合基因PCR 引物 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-33页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第30-31页 |
| ·质粒 DNA 的大量制备 | 第31页 |
| ·DNA的限制性酶切反应 | 第31-32页 |
| ·目的DNA 片段的电泳回收 | 第32页 |
| ·融合基因的PCR 扩增 | 第32页 |
| ·载体与DNA 的连接反应 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·质粒DNA 转化大肠杆菌 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-43页 |
| ·人乳铁蛋白基因的分子设计 | 第33-34页 |
| ·人乳铁蛋白基因的合成 | 第34-42页 |
| ·人乳铁蛋白基因hLf 与胸腺肽基因T-α1 的融合 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43页 |
| 5 小结 | 第43-44页 |
| 第三章 Tα1hLf 和vgb 在毕赤酵母中表达 | 第44-62页 |
| 1 材料 | 第44-45页 |
| ·菌种 | 第44页 |
| ·本研究中应用的主要质粒 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·试剂及仪器 | 第44-45页 |
| ·PCR 引物 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-52页 |
| ·质粒 DNA 的小量提取 | 第45页 |
| ·质粒DNA 的大量制备 | 第45页 |
| ·DNA 的限制性酶切反应 | 第45页 |
| ·目的DNA 片段的电泳回收 | 第45页 |
| ·粘端连接 | 第45页 |
| ·基因的 PCR 扩增 | 第45页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·质粒DNA 转化大肠杆菌 | 第45页 |
| ·蛋白质的 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第45-47页 |
| ·Western bolt 鉴定 | 第47-49页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第49页 |
| ·酵母的电击转化及重组子的初筛 | 第49-50页 |
| ·酵母重组子甲醇利用型的确定 | 第50页 |
| ·分泌型转化子的筛选 | 第50页 |
| ·酵母总DNA 的提取 | 第50-51页 |
| ·酵母胞内蛋白的检测 | 第51页 |
| ·转化子的摇瓶表达研究 | 第51页 |
| ·融合蛋白中乳铁蛋白抑菌活性检测 | 第51页 |
| ·VHb 的定性方法 | 第51-52页 |
| ·不同供氧条件下胞内表达的VHb 对毕赤酵母生长的影响 | 第52页 |
| ·菌密度的测定 | 第52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-61页 |
| ·表达载体构建 | 第52-53页 |
| ·表达载体的鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组载体转化毕赤酵母及重组酵母的筛选 | 第54-55页 |
| ·分泌型转化子的筛选 | 第55页 |
| ·重组子的PCR 检测 | 第55-56页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白检测 | 第56-57页 |
| ·利用人乳铁蛋白抗原 Western Blotting 检测融合蛋白 | 第57页 |
| ·表达产物的生物活性检测 | 第57-58页 |
| ·VHb 的活性检测 | 第57-58页 |
| ·融合基因中人乳铁蛋白的抑菌活性检测 | 第58页 |
| ·贫氧条件对酵母菌体生长影响的研究 | 第58-60页 |
| ·酵母转化子的摇瓶诱导表达分析 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61页 |
| 5 小结 | 第61-62页 |
| 第四章 Tα1hLf 和vgb 基因在生菜中表达 | 第62-79页 |
| 1 材料 | 第62-64页 |
| ·菌株与植物材料 | 第62页 |
| ·有关的质粒 | 第62页 |
| ·培养基 | 第62-64页 |
| ·试剂及仪器 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-68页 |
| ·质粒DNA 的小量提取 | 第64页 |
| ·质粒DNA 的大量制备 | 第64页 |
| ·DNA 的限制性酶切反应 | 第64页 |
| ·目的DNA 片段的电泳回收 | 第64页 |
| ·粘端连接 | 第64页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第64页 |
| ·质粒DNA 转化大肠杆菌 | 第64页 |
| ·蛋白质的SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第64-65页 |
| ·根瘤农杆菌感受态细胞的制备 | 第65页 |
| ·表达载体转化根癌农杆菌 | 第65页 |
| ·生菜无菌苗的培养 | 第65页 |
| ·农杆菌介导的叶盘法转化生菜 | 第65页 |
| ·Kan 抗性植株的筛选 | 第65页 |
| ·再生苗诱导生根 | 第65-66页 |
| ·无菌苗的移栽 | 第66页 |
| ·生菜基因组DNA 的提取 | 第66页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第66页 |
| ·生菜总蛋白提取 | 第66页 |
| ·ELISA 检测融合蛋白中人乳铁蛋白的表达 | 第66-68页 |
| ·生菜表达的 VHb 蛋白差示光谱检测 | 第68页 |
| 3 结果分析 | 第68-77页 |
| ·融合基因植物表达表达载体构建 | 第68-72页 |
| ·将Tα1hLf 克隆进中间载体 | 第68页 |
| ·构建双表达盒中间载 | 第68-71页 |
| ·双表达盒植物表达载体构建 | 第71-72页 |
| ·表达载体鉴定 | 第72-73页 |
| ·表达载体转化农杆菌 | 第73页 |
| ·农杆菌介导转化生菜 | 第73页 |
| ·PCR 检测再生苗 | 第73-75页 |
| ·ELASA 分析转基因苗中融合蛋白表达情况 | 第75-77页 |
| ·差示光谱分析VHb 蛋白 | 第77页 |
| 4 讨论 | 第77-78页 |
| 5 小结 | 第78-79页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 附录 | 第87-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 作者简介 | 第107页 |
