| 英文缩写说明 | 第1-11页 |
| 摘要 | 第11-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-29页 |
| ·基因转录水平的顺式作用元件 | 第14-17页 |
| ·核心启动子 | 第14-15页 |
| ·启动子上游序列 | 第15页 |
| ·增强子 | 第15-16页 |
| ·绝缘子 | 第16页 |
| ·时序与组织特异性调控序列 | 第16页 |
| ·性别控制与同源异型盒 | 第16-17页 |
| ·响应元件 | 第17页 |
| ·反式作用因子 | 第17-18页 |
| ·激素对昆虫基因的转录调控 | 第18-22页 |
| ·几种主要昆虫激素的生物学功能 | 第18-20页 |
| ·昆虫激素对相关基因的表达调控 | 第20-22页 |
| ·家蚕基因启动子调控序列研究进展 | 第22-28页 |
| ·丝素基因启动子 | 第23-24页 |
| ·丝胶基因启动子 | 第24-25页 |
| ·P25基因启动子 | 第25页 |
| ·贮藏蛋白基因启动子 | 第25-26页 |
| ·卵壳蛋白基因启动子 | 第26-27页 |
| ·肌动蛋白基因启动子 | 第27-28页 |
| ·小结 | 第28-29页 |
| 第二章 研究目的与内容 | 第29-31页 |
| ·研究目的与意义 | 第29-30页 |
| ·研究内容 | 第30-31页 |
| ·家蚕、野桑蚕LSP启动子的特性分析 | 第30页 |
| ·家蚕、野桑蚕HSC70-4启动子的功能特性分析 | 第30页 |
| ·BmNPVhr3对家蚕、野桑蚕HSC70-4启动子活性的增强功能 | 第30-31页 |
| 第三章 一般实验材料和方法 | 第31-42页 |
| ·实验材料 | 第31-34页 |
| ·昆虫细胞、家蚕与野桑蚕 | 第31页 |
| ·昆虫激素 | 第31页 |
| ·质粒和菌种 | 第31页 |
| ·酶试剂及试剂盒 | 第31页 |
| ·其它主要试剂 | 第31页 |
| ·细菌培养基 | 第31-32页 |
| ·昆虫细胞培养基 | 第32页 |
| ·常用溶液及缓冲液 | 第32-34页 |
| ·所用主要仪器和设备 | 第34页 |
| ·普通实验方法 | 第34-42页 |
| ·细胞的传代 | 第34页 |
| ·细胞的冻存 | 第34-35页 |
| ·细胞的复苏 | 第35页 |
| ·细胞计数 | 第35页 |
| ·功能质粒由脂质体介导在昆虫细胞中的转染 | 第35页 |
| ·功能质粒在细胞和家蚕幼虫中的转染、瞬间表达及激素处理 | 第35-36页 |
| ·功能质粒在细胞中的转染、瞬间表达及热激处理 | 第36页 |
| ·功能质粒转染后四龄家蚕幼虫的热激处理 | 第36页 |
| ·功能质粒转染后五龄家蚕幼虫的热激处理 | 第36页 |
| ·功能质粒转染后五龄家蚕幼虫的冷激处理 | 第36页 |
| ·家蚕、野桑蚕基因组DNA的制备方法 | 第36-37页 |
| ·DNA浓度测定 | 第37页 |
| ·基因组DNA的碱变性方法 | 第37页 |
| ·PCR反应 | 第37-38页 |
| ·碱法少量快速抽提质粒DNA | 第38页 |
| ·碱法大量制备质粒DNA | 第38页 |
| ·限制性内切酶反应 | 第38-39页 |
| ·DNA片段的分离与回收 | 第39页 |
| ·DNA的连接 | 第39页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第40页 |
| ·细胞抽提物的制备 | 第40页 |
| ·荧光素酶分析 | 第40页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第40页 |
| ·β-半乳糖苷酶比活测定 | 第40-42页 |
| 第四章 野桑蚕、家蚕LSP基因5'侧翼区的克隆与序列分析 | 第42-50页 |
| ·材料与方法 | 第42-43页 |
| ·试验材料与试剂 | 第42-43页 |
| ·引物的合成 | 第43页 |
| ·野桑蚕、家蚕基因组DNA的提取 | 第43页 |
| ·PCR法克隆野桑蚕、家蚕LSP基因5'侧翼区片段及其纯化 | 第43页 |
| ·野桑蚕、家蚕的LSP基因5'侧翼区片段的亚克隆及测序 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-44页 |
| ·野桑蚕、家蚕LSP基因5'侧翼区片段的扩增 | 第43页 |
| ·重组质粒pSK-BmandLSP5'FR、pSK-BmLSP5'FR的酶切鉴定 | 第43页 |
| ·BmandLSP5'FR、BmLSP5'FR测序结果与序列分析 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-50页 |
| 第五章 家蚕幼虫血清蛋白基因(BmLSP)启动子特性分析 | 第50-63页 |
| ·材料与方法 | 第50-55页 |
| ·试验材料 | 第50-51页 |
| ·报告质粒pSKBmLSP(Ⅰ)-luc的构建 | 第51页 |
| ·缺失不同调控元件的启动子的报告质粒构建 | 第51页 |
| ·质粒的提取、酶切、DNA片段制备、连接与转化 | 第51页 |
| ·家蚕细胞培养与转染 | 第51-52页 |
| ·瞬时表达测定分析 | 第52-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-61页 |
| ·缺失突变启动子的报告质粒的酶切鉴定 | 第55页 |
| ·BmN细胞中BmLSP(Ⅰ)启动子的转录活性 | 第55页 |
| ·第一内含子对BmLSP基因启动子活性影响 | 第55-58页 |
| ·启动子上游区对BmLSP基因启动子活性影响 | 第58页 |
| ·各调控元件对BmLSP基因启动子活性影响的比较分析 | 第58-59页 |
| ·外源昆虫激素对BmLSP基因启动子活性影响 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第六章 野桑蚕、家蚕热激同源蛋白基因(HSC70-4)5'侧翼区的克隆与序列分析 | 第63-68页 |
| ·材料与方法 | 第63-64页 |
| ·试验材料 | 第63页 |
| ·引物的合成 | 第63-64页 |
| ·野桑蚕、家蚕基因组DNA的提取 | 第64页 |
| ·PCR法克隆野桑蚕、家蚕HSC70-4基因5'侧翼区片段及其纯化 | 第64页 |
| ·野桑蚕、家蚕的HSC70-4基因5'侧翼区片段的亚克隆及测序 | 第64页 |
| ·序列分析与可能的顺式调控元件的预测 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-65页 |
| ·野桑蚕、家蚕HSC70-4基因5'侧翼区片段的扩增 | 第64页 |
| ·野桑蚕、家蚕、HSC70-4基因5'侧翼区片段的测序结果与序列分析 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-68页 |
| 第七章 家蚕HSC70-4基因启动子的功能分析 | 第68-78页 |
| ·材料与方法 | 第68-71页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-71页 |
| ·结果与分析 | 第71-76页 |
| ·报告质粒p3Z-BmHSC70-4-luc的酶切鉴定 | 第71页 |
| ·在常态下BmHSC70-4启动子的转录活性 | 第71-72页 |
| ·热激处理对BmHSC70-4启动子在BmN、Sf细胞和蚕体内的转录活性的影响 | 第72-73页 |
| ·冷激处理对BmHSC70-4启动子在五龄家蚕体内转录活性的影响 | 第73页 |
| ·BmHSC70-4启动子在五龄家蚕不同发育阶段的转录活性 | 第73-74页 |
| ·外源昆虫激素对BmHSC70-4启动子转录活性的影响 | 第74-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| 第八章 野桑蚕HSC70-4基因启动子的功能分析 | 第78-81页 |
| ·材料与方法 | 第78页 |
| ·材料 | 第78页 |
| ·方法 | 第78页 |
| ·结果与分析 | 第78-79页 |
| ·报告质粒p3Z-BmandHSC70-4-luc的酶切鉴定 | 第78页 |
| ·在常态下BmandHSC70-4启动子的转录活性 | 第78-79页 |
| ·热激处理对BmandHSC70-4启动子在BmN、Sf21细胞和蚕体内的转录活性的影响 | 第79页 |
| ·讨论 | 第79-81页 |
| 第九章 BmNPVhr3对家蚕、野桑蚕HSC70-4基因启动子活性的增强功能 | 第81-89页 |
| ·材料与方法 | 第82-83页 |
| ·材料 | 第82页 |
| ·方法 | 第82-83页 |
| ·结果与分析 | 第83-87页 |
| ·报告质粒的酶切鉴定 | 第83-84页 |
| ·在BmN细胞内hr3对BmHSC70-4、BmandHSC70-4启动子转录活性的增强作用 | 第84页 |
| ·在家蚕体内hr3对BmHSC70-4、BmandHSC70-4启动子的转录活性增强作用 | 第84-85页 |
| ·BmHSC70-4／hr3启动子组合在五龄家蚕不同发育阶段的转录活性 | 第85-86页 |
| ·昆虫激素对BmHSC70-4／hr3启动子组合的活性的影响 | 第86-87页 |
| ·讨论 | 第87-89页 |
| 第十章 结论 | 第89-94页 |
| ·Bm／Bmand LSP5'FR克隆与BmLSP启动子功能特性分析结论 | 第89-90页 |
| ·Bm／Bmand HSC70-45'FR片段克隆及其功能特性分析结论 | 第90-92页 |
| ·BmNPVhr3显著增强Bm／Bmand HSC70-4启动子转录活性 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 附录(测序图) | 第105-115页 |
| 攻读博士期间发表论文统计 | 第115-117页 |
| 作者简历 | 第117页 |
