| 致谢 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| ·背景与意义 | 第10-13页 |
| ·研究策略 | 第13-16页 |
| ·探究正反向不同长度的5’-UTR序列的启动子活性 | 第13-14页 |
| ·L1-ORF1基因对LINE-1的抑制以及调控机制 | 第14-16页 |
| 2 实验材料与方法 | 第16-32页 |
| ·实验材料 | 第16-20页 |
| ·细胞与质粒载体 | 第16页 |
| ·主要工具酶及试剂 | 第16页 |
| ·主要溶液的配制 | 第16-18页 |
| ·DNA合成和测序 | 第18-19页 |
| ·microRNA761的序列 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·主要耗材 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-32页 |
| ·细胞培养 | 第20页 |
| ·细胞基因组的提取 | 第20-21页 |
| ·全长目的基因的T载体的构建 | 第21-23页 |
| ·报告基因表达载体的构建 | 第23-25页 |
| ·转染级质粒的提取 | 第25页 |
| ·质粒转染 | 第25-26页 |
| ·荧光素酶的检测 | 第26-27页 |
| ·microRNA的转染 | 第27页 |
| ·Western Blot | 第27-29页 |
| ·荧光定量PCR | 第29-30页 |
| ·细胞培养中抑制甲基化作用 | 第30页 |
| ·间接免疫荧光 | 第30-31页 |
| ·免疫共沉淀 | 第31-32页 |
| 3 实验结果 | 第32-51页 |
| ·HepG2细胞基因组的提取 | 第32页 |
| ·全长目的基因的T载体的构建 | 第32-33页 |
| ·报告基因表达载体的构建 | 第33-36页 |
| ·目的基因片段的选择 | 第33-34页 |
| ·pCBG99-control真核表达载体构建示意图 | 第34-35页 |
| ·扩增目的片段 | 第35页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·萤光素酶表达强度检测 | 第36-42页 |
| ·正反向不同长度的5'-UTR序列的启动子活性检测 | 第36-37页 |
| ·5'-UTR序列对相邻基因表达的影响 | 第37-40页 |
| ·microRNA761对5'-UTR启动子活性的影响 | 第40-42页 |
| ·ORF1蛋白表达的Western Blot验证 | 第42-43页 |
| ·L1-ORF1p对5'-UTR甲基化的影响 | 第43-47页 |
| ·L1-ORF1p对细胞核中组蛋白的影响 | 第47-49页 |
| ·ORF-1p和AG02蛋白的相互作用验证 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| ·正反向不同长度的5’-UTR序列的启动子活性 | 第51-52页 |
| ·microRNA761对LINE-1启动子活性影响的研究 | 第52页 |
| ·L1-ORF1基因对LINE-1的抑制以及调控机制 | 第52-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 附录A | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59-61页 |
| 学位论文数据集 | 第61页 |
