| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 1 前言 | 第12-39页 |
| ·极地微生物学研究概述 | 第12-15页 |
| ·分子微生物学研究概述 | 第15-17页 |
| ·极端酶的研究概述 | 第17-31页 |
| ·几种极端酶简介 | 第17-18页 |
| ·低温酶的研究 | 第18-26页 |
| ·低温微生物特征 | 第18-20页 |
| ·低温酶的特征 | 第20-26页 |
| ·极端酶的克隆与表达 | 第26-31页 |
| ·几种极端酶的成功表达示例 | 第26-28页 |
| ·极端酶克隆与表达过程中常遇到的问题及解决方案 | 第28-31页 |
| ·脂肪酶 | 第31-37页 |
| ·脂肪酶的筛选 | 第31页 |
| ·脂肪酶的催化特性 | 第31-33页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第33-34页 |
| ·脂肪酶的表达与分泌机制 | 第34-37页 |
| ·脂肪酶自身的表达与分泌 | 第34-36页 |
| ·脂肪酶在大肠杆菌中的表达与促分泌 | 第36-37页 |
| ·本研究的意义与创新点 | 第37-39页 |
| 2 产低温脂肪酶微生物的筛选 | 第39-53页 |
| ·材料与方法 | 第39-41页 |
| ·样品的采集 | 第39-40页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·筛选方法 | 第40页 |
| ·发酵培养 | 第40页 |
| ·脂肪酶酶活力的测定 | 第40-41页 |
| ·脂肪酶活力计算 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-49页 |
| ·产低温脂肪酶菌株的筛选 | 第41-47页 |
| ·5株脂肪酶阳性菌株的生长及产酶比较 | 第47-49页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 3 南极微生物产低温脂肪酶菌株的分子鉴定 | 第53-68页 |
| ·材料与方法 | 第54-55页 |
| ·菌株、载体、试剂 | 第54页 |
| ·感受态细胞的制备及DNA片段的凝胶回收 | 第54页 |
| ·16S rDNA的PCR扩增及其克隆文库的构建 | 第54页 |
| ·16S rDNA序列测定与系统进化关系的分析 | 第54-55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-62页 |
| ·单菌落直接PCR扩增法 | 第55-56页 |
| ·5株产低温脂肪酶菌株的16S rDNA的克隆与序列分析 | 第56-62页 |
| ·5株菌株的系统发育分析 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 4 菌株2-5-10-1的产酶及酶学性质 | 第68-87页 |
| ·材料与方法 | 第69页 |
| ·菌株与培养基 | 第69页 |
| ·培养条件 | 第69页 |
| ·测定pH对酶活影响的实验方法 | 第69页 |
| ·测定温度影响酶活的实验方法 | 第69页 |
| ·结果与讨论 | 第69-86页 |
| ·温度对菌株2-5-10-1的产酶和生长的影响 | 第69-72页 |
| ·不同的产酶诱导物对菌株2-5-10-1产酶的影响 | 第72-73页 |
| ·培养液的初始pH值对菌株产酶的影响 | 第73-74页 |
| ·不同接种密度对产酶的影响 | 第74-75页 |
| ·产酶的遗传稳定性实验 | 第75-76页 |
| ·菌株2-5-10-1所产低温脂肪酶性质的研究 | 第76-86页 |
| ·动力学性质 | 第76-79页 |
| ·热力学性质 | 第79-80页 |
| ·低温脂肪酶的最适作用温度 | 第80-82页 |
| ·低温脂肪酶的最适作用pH值 | 第82-83页 |
| ·低温脂肪酶的温度稳定性 | 第83-84页 |
| ·金属离子对低温脂肪酶活性的影响 | 第84-86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| 5 脂肪酶基因的克隆与表达 | 第87-104页 |
| ·材料与方法 | 第88-93页 |
| ·实验材料 | 第88-89页 |
| ·菌株和质粒 | 第88页 |
| ·工具酶、抗生素及化学试剂 | 第88页 |
| ·测序用引物 | 第88页 |
| ·培养基 | 第88-89页 |
| ·方法 | 第89-93页 |
| ·菌株2-5-10-1的染色体DNA的提取 | 第89页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第89-90页 |
| ·DNA的纯度检测及摩尔数计算 | 第90页 |
| ·CaCl_2法感受态细胞的制备与转化 | 第90-91页 |
| ·电穿孔法感受态细胞的制备与转化 | 第91页 |
| ·DNA的凝胶洗脱 | 第91-92页 |
| ·DNA的浓缩 | 第92页 |
| ·末端半补齐反应 | 第92页 |
| ·去磷酸化反应 | 第92-93页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第93页 |
| ·结果 | 第93-99页 |
| ·Insert的制备 | 第93-94页 |
| ·载体的制备 | 第94-95页 |
| ·文库构建 | 第95-98页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第98-99页 |
| ·序列测定与序列分析 | 第99页 |
| ·讨论 | 第99-103页 |
| ·小结 | 第103-104页 |
| 6 低温脂肪酶基因的生物信息学分析 | 第104-114页 |
| ·材料与方法 | 第104-105页 |
| ·材料 | 第104页 |
| ·方法 | 第104-105页 |
| ·结果 | 第105-109页 |
| ·低温脂肪酶序列的同源性分析 | 第105-108页 |
| ·低温脂肪酶的二级结构分析 | 第108页 |
| ·低温脂肪酶结构域预测与分析 | 第108-109页 |
| ·低温脂肪酶的疏水性分析 | 第109页 |
| ·Swiss-Model模建 | 第109页 |
| ·讨论 | 第109-113页 |
| ·小结 | 第113-114页 |
| 结论 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-126页 |
| 附录 | 第126-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 投稿及发表文章情况 | 第131页 |