| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 第一章 | 第14-40页 |
| ·基因表达系统的研究与进展状况 | 第14-18页 |
| ·原核生物表达系统 | 第14-16页 |
| ·酵母表达系统 | 第16-18页 |
| ·丝状真菌表达系统 | 第18-25页 |
| ·丝状真菌表达系统的特点 | 第18页 |
| ·丝状真菌表达系统研究近况 | 第18-19页 |
| ·常见丝状真菌表达系统的构建和改进 | 第19-25页 |
| ·表达系统的检测-绿色荧光蛋白(GFP)的运用原理与现状分析 | 第25-29页 |
| ·GFP的发现和性质 | 第25页 |
| ·GFP的发光机制 | 第25-28页 |
| ·GFP的优点 | 第28页 |
| ·GFP的应用前景 | 第28-29页 |
| ·存在的问题 | 第29页 |
| ·血小板源生长因子(PDGF)的研究现状 | 第29-34页 |
| ·血小板源生长因子的结构 | 第30-31页 |
| ·PDGF的生物学功能 | 第31-32页 |
| ·PDGF的应用范围 | 第32-33页 |
| ·重组PDGF的表达研究 | 第33-34页 |
| ·本课题研究的意义及主要内容 | 第34-40页 |
| ·本课题研究的意义 | 第34-36页 |
| ·本课题研究的主要内容 | 第36-37页 |
| ·本课题研究的实验设计 | 第37-40页 |
| 第二章 材料与方法 | 第40-59页 |
| ·实验材料 | 第40-45页 |
| ·主要仪器设备 | 第40-41页 |
| ·主要试剂 | 第41-42页 |
| ·菌株和质粒 | 第42页 |
| ·培养基和常用试剂 | 第42-45页 |
| ·实验方法 | 第45-59页 |
| ·P.antarctica的活化 | 第45-46页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第46页 |
| ·目的基因的获得 | 第46页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的制备 | 第46-47页 |
| ·真菌总DNA的提取 | 第47-48页 |
| ·DNA的酶切 | 第48页 |
| ·DNA的体外连接 | 第48页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第48页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第48-49页 |
| ·转化子的快速鉴定 | 第49页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳分析 | 第49页 |
| ·外源基因导入P.antarctica和P.flocculosa | 第49-50页 |
| ·重组P.antarctica中外源基因的稳定性测定 | 第50-51页 |
| ·基因组DNA的杂交分析——斑点印迹法 | 第51-52页 |
| ·RNA的Northern印迹杂交 | 第52-53页 |
| ·放射自显影 | 第53-54页 |
| ·Western杂交 | 第54-56页 |
| ·PDGF生物学活性的检测 | 第56页 |
| ·荧光显微镜(Fluorescence microscope)的使用 | 第56-59页 |
| 第三章 表达系统的构建 | 第59-76页 |
| ·寻找Pseudozyma antarctica转化子的抗性标记和抗性基因的启动子 | 第59-61页 |
| ·Pseudozyma antarctica原生质体的制备和抗性药物浓度的筛选 | 第59-60页 |
| ·利用抗性标记寻找启动子 | 第60-61页 |
| ·构建P.antarctica丝状真菌转化载体 | 第61-71页 |
| ·共转化载体 | 第61-62页 |
| ·运用报道基因检验转化系统 | 第62-68页 |
| ·单质粒转化系统的构建 | 第68-71页 |
| ·P.antarctica表达GFP的研究 | 第71-74页 |
| ·重组转化丝状真菌的获得 | 第71-72页 |
| ·重组丝状真菌的鉴定 | 第72-74页 |
| ·P.antarctica和P.flocculosa中目的基因稳定性的分析 | 第74页 |
| ·本章小结 | 第74-76页 |
| 第四章 表达载体的改进 | 第76-92页 |
| ·增加基因量 | 第76-84页 |
| ·引物的设计与缺陷启动子的扩增 | 第76-78页 |
| ·重组质粒ppgGFP-hyg-x的构建 | 第78-80页 |
| ·结果验证 | 第80-84页 |
| ·寻找强启动子 | 第84-90页 |
| ·引物的设计和GPD基因的扩增 | 第84-86页 |
| ·重组子的获得 | 第86-88页 |
| ·GPD启动子表达GFP的研究 | 第88-90页 |
| ·本章小结 | 第90-92页 |
| 第五章 血小板源生长因子(PDGF)的表达 | 第92-99页 |
| ·PDGF-B链的PCR扩增和表达载体的构建 | 第92-96页 |
| ·引物的设计,合成和PDGF基因的扩增 | 第92-94页 |
| ·重组质粒ppPDGF-hyg-2的构建 | 第94-96页 |
| ·重组质粒转化P.antarctica和P.flocculosa | 第96-98页 |
| ·高拷贝转化子的筛选 | 第96-97页 |
| ·表达产物的Western blot分析 | 第97-98页 |
| ·PDGF-B的生物学活性检测 | 第98页 |
| ·本章小结 | 第98-99页 |
| 结论与展望 | 第99-106页 |
| 参考文献 | 第106-115页 |
| 在读期间发表论文 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
