中文摘要 | 第1-8页 |
英文摘要 | 第8-10页 |
缩略词表 | 第10-11页 |
第一部分 文献综述:植物几丁质酶的研究进展 | 第11-28页 |
1 植物几丁质酶的特性和生物学作用 | 第11-13页 |
2 植物几丁质酶的结构和催化机制 | 第13-18页 |
3 植物几丁质酶基因组结构 | 第18页 |
4 植物几丁质酶的分类 | 第18-21页 |
5 植物几丁质酶的分子进化 | 第21-23页 |
6 植物转几丁质酶基因工程 | 第23-24页 |
7 几丁质结合域的作用 | 第24-27页 |
8 本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
第二部分 酵母表达载体的构建、蛋白的诱导表达及纯化 | 第28-49页 |
1 材料与方法 | 第28-37页 |
1.1 材料 | 第28-30页 |
1.2 方法 | 第30-37页 |
2 结果与分析 | 第37-46页 |
2.1 酵母表达载体pP17、pP28、和pCat的构建 | 第37-40页 |
2.2 转化酵母和抗G418重组菌的筛选 | 第40页 |
2.3 重组酵母菌株的PCR鉴定 | 第40-41页 |
2.4 重组酵母菌的Southern杂交分析 | 第41页 |
2.5 蛋白质的小量诱导表达 | 第41-42页 |
2.6 最佳诱导时间的确定 | 第42-43页 |
2.7 Western blot分析 | 第43-44页 |
2.8 诱导方法的改进 | 第44页 |
2.9 蛋白的大量诱导表达和纯化 | 第44-46页 |
3 讨论 | 第46-48页 |
4 结论 | 第48-49页 |
第三部分 几丁质酶酶活性与功能分析 | 第49-68页 |
1 材料与方法 | 第49-52页 |
1.1 材料 | 第49-50页 |
1.2 方法 | 第50-52页 |
2 结果与分析 | 第52-63页 |
2.1 以CM-chitin-RBV为底物的几丁质酶学特性 | 第52-56页 |
2.2 以胶状几丁质为底物的几丁质酶学特性 | 第56-60页 |
2.3 凝集素活性测定 | 第60页 |
2.4 抗细菌活性测定 | 第60-62页 |
2.5 离体抑真菌实验 | 第62-63页 |
3 讨论 | 第63-66页 |
3.1 酶活性方面 | 第63-65页 |
3.2 凝集素活性方面 | 第65页 |
3.3 抗细菌的可能性 | 第65-66页 |
3.4 抗真菌方面 | 第66页 |
4 结论 | 第66-68页 |
第四部分 番茄组织培养与几丁质酶基因向番茄的转化 | 第68-82页 |
1 材料与方法 | 第68-74页 |
1.1 材料 | 第68-70页 |
1.2 方法 | 第70-74页 |
2 结果与分析 | 第74-80页 |
2.1 小型农杆菌转化载体构建 | 第74页 |
2.2 pBj17和pBj28的确证 | 第74-75页 |
2.3 番茄组织培养 | 第75-77页 |
2.4 几丁质酶基因向番茄的转化 | 第77-80页 |
3 讨论 | 第80-81页 |
4 结论 | 第81-82页 |
本研究的创新之处及研究展望 | 第82-83页 |
1 创新之处 | 第82页 |
2 研究展望 | 第82-83页 |
参考文献 | 第83-92页 |
附录 | 第92-102页 |
附录A: Genbank中收录的芥菜BjCHI 1全长cDNA序列 | 第92-94页 |
附录B: pPIC9K质粒的AOX 1启动子序列和多克隆位点 | 第94-95页 |
附录C: BjCHI 1的核苷酸序列和所编码的成熟蛋白质序列 | 第95-96页 |
附录D: BjCHI 2的核苷酸序列和所编码的成熟蛋白质序列 | 第96-98页 |
附录E: BjCHI 3的核苷酸序列和所编码的成熟蛋白质序列 | 第98-100页 |
附录F: 计算Km值的数据 | 第100-102页 |
致谢 | 第102-103页 |
作者简历与发表论文情况 | 第103页 |