| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述及前言 | 第12-20页 |
| 1 宏基因组学及其在胃肠道微生物研究中的应用现状 | 第12-17页 |
| ·宏基因组概念 | 第13页 |
| ·宏基因组技术路线 | 第13-15页 |
| ·胃肠道微生物水解酶基因资源研究 | 第15-16页 |
| ·胃肠道微生物与宿主疾病发生的相关性 | 第16-17页 |
| 2 微生物多态性研究方法 | 第17-19页 |
| ·变性凝胶电泳(DGGE)分析 | 第17-18页 |
| ·限制性片段长度多态性(RFLP)分析 | 第18-19页 |
| 3 本课题的研究内容及其目的意义 | 第19-20页 |
| 第二章 牛胃微生物宏基因组文库的构建和筛选 | 第20-33页 |
| 1 实验材料 | 第20-22页 |
| ·样品采集 | 第20页 |
| ·常用仪器 | 第20-21页 |
| ·常用酶和试剂 | 第21页 |
| ·菌株和试剂盒 | 第21-22页 |
| ·试剂和培养基配制 | 第22页 |
| 2 试验方法 | 第22-27页 |
| ·低熔点琼脂糖包埋裂解法 | 第22-23页 |
| ·脉冲场电泳 | 第23-24页 |
| ·酶切条件确定 | 第24页 |
| ·电洗脱获得酶切片段 | 第24-25页 |
| ·载体连接 | 第25页 |
| ·点透析 | 第25页 |
| ·电转化 | 第25-26页 |
| ·转化子检测 | 第26页 |
| ·电转感受态制备 | 第26页 |
| ·克隆的挑取及保存 | 第26-27页 |
| ·β-葡萄糖苷酶阳性克隆子筛选 | 第27页 |
| ·纤维素外切酶阳性克隆子筛选 | 第27页 |
| 3 结果 | 第27-31页 |
| ·大片段DNA(HMDNA)的获得 | 第27-28页 |
| ·酶切条件的确定 | 第28-29页 |
| ·酶切后大片段回收 | 第29页 |
| ·插入片段大小 | 第29-30页 |
| ·产酶基因阳性克隆子的筛选 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| ·大片段宏基因组文库构建 | 第31-32页 |
| ·产酶基因阳性克隆子筛选 | 第32-33页 |
| 第三章 芒草单一喂养牛牛胃中微生物多样性调查 | 第33-46页 |
| 1 实验材料 | 第33-34页 |
| ·样品采集 | 第33页 |
| ·实验仪器 | 第33页 |
| ·酶及生化试剂 | 第33页 |
| ·溶液的配制 | 第33-34页 |
| 2 试验方法 | 第34-38页 |
| ·样品中总DNA的提取及检测 | 第34-35页 |
| ·样品PCR扩增 | 第35-37页 |
| ·变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE) | 第37页 |
| ·限制性片段长度多态性分析(RFLP) | 第37页 |
| ·银染 | 第37-38页 |
| ·图谱分析 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-44页 |
| ·细菌16S rRNA及真菌18S rDNA片段扩增 | 第38-39页 |
| ·变性梯度凝胶电泳及其聚类分析 | 第39-41页 |
| ·DGGE图谱多样性分析 | 第41-42页 |
| ·RFLP图谱及分析 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 总结、创新点和后续工作设想 | 第46-48页 |
| 总结 | 第46页 |
| 创新点 | 第46-47页 |
| 后续工作展望 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录 | 第53-56页 |
| 细菌人工染色体载体图谱 | 第53-54页 |
| DNA分子量标准 | 第54-55页 |
| 缩略词对照表 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |