摘要 | 第1-9页 |
ABSTRACT | 第9-10页 |
前言 | 第10-11页 |
第一章 文献综述 | 第11-24页 |
·花生黄曲霉病及抗黄曲霉研究进展 | 第11-12页 |
·植物启动子的研究进展 | 第12-18页 |
·高等植物启动子的结构 | 第12-13页 |
·植物启动子的分类 | 第13-18页 |
·植物差异表达基因的研究方法 | 第18-20页 |
·消减杂交 | 第18页 |
·mRNA 差异显示技术 | 第18-19页 |
·cDNA 代表性差异分析 | 第19页 |
·抑制消减杂交 | 第19-20页 |
·基因芯片技术 | 第20页 |
·植物全长基因克隆的方法 | 第20-22页 |
·文库筛选法 | 第21页 |
·基于PCR 技术扩增目的基因获得全长基因 | 第21-22页 |
·电子克隆(silico cloning) | 第22页 |
·本研究的目的意义 | 第22-24页 |
第二章 花生果种皮全长CDNA 文库的构建与特异基因全长的克隆 | 第24-38页 |
1 材料与方法 | 第24-28页 |
·材料 | 第24-25页 |
·实验所用材料 | 第24页 |
·试剂 | 第24-25页 |
·引物 | 第25页 |
·方法 | 第25-28页 |
·花生果种皮总RNA 提取与mRNA 分离 | 第25页 |
·花生果种皮全长cDNA 文库构建 | 第25-28页 |
2 结果与分析 | 第28-35页 |
·花生果种皮全长CDNA 文库构建质量分析 | 第28页 |
·花生果种皮特异基因的筛选 | 第28-35页 |
·PCR 筛选全长文库获得特异基因克隆 | 第28-30页 |
·阳性克隆质粒测序获得特异基因全长序列分析 | 第30页 |
·三个果种皮特异表达基因的生物信息学分析 | 第30-35页 |
3. 讨论 | 第35-38页 |
·SMART 技术是构建全长文的优缺点 | 第35-36页 |
·基于PCR 技术筛选全长文库是获得基因全长的有效途径 | 第36-38页 |
第三章 花生果、种皮特异表达基因启动子的克隆与序列分析 | 第38-52页 |
1 材料与方法 | 第38-44页 |
·实验材料 | 第38-39页 |
·方法 | 第39-44页 |
·植物材料的准备 | 第39页 |
·花生幼根DNA 的提取 | 第39-40页 |
·DNA 浓度的测定 | 第40页 |
·DNA 的酶切消化、加接头 | 第40-41页 |
·启动子克隆 | 第41-42页 |
·PCR 产物的回收 | 第42页 |
·回收产物的连接 | 第42页 |
·连接产物转化E.coli DH5α | 第42-44页 |
·阳性克隆质粒提取 | 第44页 |
2 结果与分析 | 第44-49页 |
·DNA 提取及内切酶消化 | 第44-45页 |
·启动子片段克隆结果 | 第45-46页 |
·AHPSC11、AHPSG8 基因启动子片段连接转化后菌落PCR 检测结果 | 第46页 |
·AHPSC11、AHPSG8 启动子测序结果 | 第46-49页 |
·AhPSC11 启动子序列分析及与AhPSC11 基因拼接结果 | 第46-48页 |
·AhPSG8 基因上游序列分析 | 第48-49页 |
3 讨论 | 第49-52页 |
·植物组织特异表达启动子克隆的意义 | 第49-50页 |
·植物启动子区功能域的生物信息学预测在启动子鉴定中具有重要作用 | 第50页 |
·植物特异表达启动子结构特征与特异表达的关系 | 第50-52页 |
参考文献 | 第52-58页 |
致谢 | 第58-59页 |
缩写词表 | 第59-60页 |
附录一:ATCRY1C, ATCRY2C 及ATCRY1F 等酵母双杂交诱饵蛋白表达载体构建 | 第60-62页 |
附录二:花生果种皮特异基因及启动子测序结果部分峰图 | 第62-64页 |