| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-28页 |
| ·葡萄球菌及食物中毒 | 第10-22页 |
| ·葡萄球菌分类 | 第10-11页 |
| ·金黄色葡萄球菌基本特征 | 第11-12页 |
| ·葡萄球菌的生长与生态 | 第12-13页 |
| ·葡萄球菌与食物中毒 | 第13-14页 |
| ·葡萄球菌肠毒素研究概况 | 第14页 |
| ·葡萄球菌肠毒素的种类 | 第14页 |
| ·肠毒素蛋白 | 第14-18页 |
| ·葡萄球菌肠毒素编码基因 | 第18-22页 |
| ·影响葡萄球菌肠毒素产生的因素 | 第22页 |
| ·葡萄球菌肠毒素的检测技术 | 第22-26页 |
| ·动物学实验 | 第23页 |
| ·免疫血清学方法 | 第23-24页 |
| ·超抗原技术 | 第24-25页 |
| ·分子生物学方法 | 第25-26页 |
| ·生物传感器技术 | 第26页 |
| ·展望 | 第26-27页 |
| ·葡萄球菌肠毒素研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 葡萄球菌肠毒素基因检测PCR技术的建立 | 第28-48页 |
| ·实验材料 | 第28-33页 |
| ·实验菌种 | 第28-31页 |
| ·主要试剂 | 第31-33页 |
| ·试验方法 | 第33-36页 |
| ·生物信息学分析，设计合成不同肠毒素PCR引物 | 第33-35页 |
| ·葡萄球菌肠毒素模板DNA的制备 | 第35页 |
| ·PCR确证葡萄球菌及对各型肠毒素的检测 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-44页 |
| ·葡萄球菌分子生物学方法鉴定 | 第36-37页 |
| ·DNA提取方法的确定 | 第37页 |
| ·PCR程序的确定 | 第37-38页 |
| ·各型葡萄球菌肠毒素PCR检测结果 | 第38-44页 |
| ·讨论 | 第44-47页 |
| ·葡萄球菌肠毒素基因分布的特点 | 第44-45页 |
| ·葡萄球菌肠毒素型之间的关系 | 第45-46页 |
| ·肠毒素分布与不同种、菌株分离来源之间的关系 | 第46页 |
| ·关于葡萄球菌肠毒素的扩增 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第三章 葡萄球菌肠毒素sea、selo基因的克隆及分析 | 第48-61页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·载体与菌株 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-52页 |
| ·肠毒素SEA、SEO表达引物的设计 | 第49页 |
| ·葡萄球菌肠毒素模板DNA的制备 | 第49页 |
| ·sea和selo基因PCR扩增的反应体系及反应程序 | 第49-50页 |
| ·目的片段的回收 | 第50-51页 |
| ·目的片段与T载体的连接 | 第51页 |
| ·感受态细胞E.coli DH5α的制备 | 第51页 |
| ·连接产物的转化 | 第51页 |
| ·T-sea和T-selo重组质粒的鉴定 | 第51-52页 |
| ·sea和selo的生物信息学分析 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-59页 |
| ·SEA和SEO的信号肽分析及引物设计 | 第52-53页 |
| ·葡萄球菌型肠毒素基因sea、selo的PCR扩增 | 第53-54页 |
| ·T-sea和T-seo重组质粒的鉴定 | 第54页 |
| ·T-sea和T-selo测序结果 | 第54-55页 |
| ·sea和selo的生物信息学分析 | 第55-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·克隆基因sea、selo的比对分析 | 第59-60页 |
| ·肠毒素基因sea、selo的生物信息学特征 | 第60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第四章 葡萄球菌sea、selo基因的原核表达与纯化 | 第61-75页 |
| ·实验材料 | 第61-64页 |
| ·载体与菌株 | 第61-62页 |
| ·主要试剂 | 第62-64页 |
| ·实验方法 | 第64-70页 |
| ·sea和selo原核表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·质粒的制备 | 第65页 |
| ·目的基因的的酶切与表达载体的连接 | 第65-66页 |
| ·连接产物的转化 | 第66页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第66-67页 |
| ·重组表达质粒的转化 | 第67页 |
| ·重组表达菌的诱导表达 | 第67页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第67-68页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第68-69页 |
| ·GST-SEA和GST-SEO阳性血清的制备 | 第69页 |
| ·Western-Blot | 第69-70页 |
| ·结果 | 第70-73页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第70-71页 |
| ·基因工程重组菌的诱导表达和纯化 | 第71-72页 |
| ·重组蛋白的特异性鉴定 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-74页 |
| ·成功构建了sea和selo的表达载体 | 第73页 |
| ·关于表达载体的选择 | 第73-74页 |
| ·重组蛋白的表达、纯化及其稳定性 | 第74页 |
| ·小结 | 第74-75页 |
| 第五章 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 附录1：主要仪器设备 | 第83-84页 |
| 附录2：主要化学试剂 | 第84-85页 |
| 附录3：缩略词表 | 第85-86页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
