本论文的创新性工作 | 第1-8页 |
中文摘要 | 第8-12页 |
ABSTRACT | 第12-17页 |
缩略词表 | 第17-33页 |
第一部分 文献综述 | 第33-61页 |
第一章 禽腺病毒的研究进展 | 第33-51页 |
1 腺病毒的概况 | 第33-36页 |
·腺病毒的分类 | 第33页 |
·腺病毒的特点 | 第33-35页 |
·腺病毒的感染及复制 | 第35-36页 |
2 禽腺病毒的概况 | 第36-44页 |
·禽腺病毒的分类 | 第37-39页 |
·Ⅰ群禽腺病毒 | 第37-38页 |
·Ⅱ群禽腺病毒 | 第38-39页 |
·Ⅲ群禽腺病毒 | 第39页 |
·禽腺病毒的形态结构及形态发生特点 | 第39-40页 |
·禽腺病毒的浮力密度 | 第40-41页 |
·禽腺病毒的体外培养 | 第41页 |
·禽腺病毒的致病机理 | 第41-42页 |
·禽腺病毒的诊断方法 | 第42-43页 |
·腺病毒感染 | 第43-44页 |
·鹅的疑是腺病毒性肝炎 | 第43页 |
·鹅的腺病毒感染 | 第43-44页 |
3 雏鹅新型病毒性肠炎的研究概况 | 第44-51页 |
·雏鹅新型病毒性肠炎概述 | 第44-45页 |
·雏鹅新型病毒性肠炎病毒病原学 | 第45页 |
·雏鹅新型病毒性肠炎流行情况 | 第45页 |
·雏鹅新型病毒性肠炎临床症状 | 第45-46页 |
·雏鹅新型病毒性肠炎病理变化 | 第46-47页 |
·眼观变化 | 第46页 |
·组织学变化 | 第46-47页 |
·雏鹅新型病毒性肠炎实验室诊断 | 第47-48页 |
·病毒的分离和鉴定 | 第47页 |
·电镜检测技术 | 第47页 |
·血清学诊断 | 第47-48页 |
·防治措施 | 第48-51页 |
·疫苗免疫 | 第48页 |
·高免血清防治 | 第48页 |
·不从疫区引进雏鹅和种鹅 | 第48-49页 |
·加强饲养管理 | 第49-51页 |
第二章 腺病毒感染与宿主细胞凋亡研究进展 | 第51-61页 |
1 细胞凋亡概况 | 第51-52页 |
2 病毒感染与细胞凋亡关系 | 第52-54页 |
3 腺病毒诱导细胞凋亡的发现 | 第54-55页 |
4 腺病毒感染与细胞凋亡的作用机制 | 第55-59页 |
·EIA | 第56-57页 |
·EIB | 第57-58页 |
·E1B-19K | 第57-58页 |
·E1B-55K | 第58页 |
·E3 | 第58-59页 |
·E3区域编码的三个蛋白对细胞凋亡的阻遏作用 | 第58页 |
·E3区域编码的ADP蛋白的致细胞凋亡作用 | 第58-59页 |
·E4 | 第59页 |
·E4-ORF6 | 第59页 |
·E4-ORF4 | 第59页 |
5 结语 | 第59-61页 |
第二部分 实验研究 | 第61-229页 |
第三章 NGVEV-CN强毒在感染鸭胚体内的形态发生学以及宿主细胞超微病理学研究 | 第61-75页 |
1 材料 | 第61-63页 |
·毒株 | 第61页 |
·试验鸭胚 | 第61页 |
·主要试剂及配制 | 第61-62页 |
·主要仪器及设备 | 第62-63页 |
·器材 | 第63页 |
2 方法 | 第63-64页 |
·NGVEV适应鸭胚 | 第63页 |
·鸭胚的人工感染NGVEV试验 | 第63页 |
·透射电镜样品制备及观察 | 第63-64页 |
·透射电镜样品的制备具体步骤操作 | 第63-64页 |
·超薄切片和染色 | 第64页 |
·透射电镜观察和记录 | 第64页 |
3 结果 | 第64-72页 |
·NGVEV在鸭胚中的传代情况 | 第64页 |
·感染鸭胚眼观病理变化及电镜下NGVEV颗粒的形态特征 | 第64-65页 |
·NGVEV病毒粒子在感染鸭胚体内的分布及其形态发生特点 | 第65-66页 |
·感染鸭胚宿主的超微结构变化 | 第66-72页 |
·尿囊膜 | 第66-68页 |
·肝 | 第68-69页 |
·肌胃 | 第69页 |
·肠道 | 第69-71页 |
·心 | 第71页 |
·脑 | 第71-72页 |
4 讨论 | 第72-74页 |
·NGVEV鹅胚尿囊液在鸭胚的适应 | 第72页 |
·NGVEV病毒粒子在感染鸭胚中的形态特征和形态发生过程 | 第72页 |
·NGVEV感染鸭胚的主要靶器官和靶细胞器 | 第72-73页 |
·人工感染NGVEV雏鹅和鸭胚的宿主细胞超微结构病变的比较 | 第73-74页 |
5 小结 | 第74-75页 |
第四章 雏鹅新型病毒性肠炎病毒CN强毒株适应鸭胚成纤维细胞及其体外培养的增殖特性研究 | 第75-85页 |
1 材料 | 第75-76页 |
·毒株 | 第75页 |
·试验鸭胚 | 第75页 |
·主要试剂及配制 | 第75-76页 |
·主要仪器及设备 | 第76页 |
·器材 | 第76页 |
2 方法 | 第76-78页 |
·单层鸭胚成纤维细胞的制备 | 第76-77页 |
·NGVEV在原代鸭胚成纤维细胞上的适应 | 第77页 |
·NGVEV-CN细胞毒在DEF上增殖研究 | 第77-78页 |
·不同代次NGVEV细胞毒的病毒滴度测定 | 第77页 |
·F_5代NGVEV细胞毒在不同感染时间的病毒滴度测定 | 第77-78页 |
3 结果 | 第78-82页 |
·NGVE-CN在原代鸭胚成纤维细胞上的适应情况 | 第78-80页 |
·NGVEV-CN细胞毒在DEF细胞的增殖情况 | 第80-81页 |
·不同传代次数的NGVE-CN细胞毒的TCID_(50)测定 | 第80页 |
·F_5代不同感染时间点的NGVEV-CN细胞毒TCID_(50)测定 | 第80-81页 |
·被NGVEV感染的DEF细胞的细胞病变特征 | 第81-82页 |
4 讨论 | 第82-84页 |
·NGVEV对DEF细胞的适应 | 第82-83页 |
·NGVEV-CN细胞毒的释放 | 第83页 |
·NGVEV在DEF细胞的增殖规律 | 第83-84页 |
5 小结 | 第84-85页 |
第五章 NGVEV-CN强毒株在鸭胚成纤维细胞上的形态发生学和宿主细胞超微结构病变研究 | 第85-97页 |
1 材料 | 第85-86页 |
·毒株 | 第85页 |
·试验鸭胚 | 第85页 |
·主要试剂及配制 | 第85页 |
·细胞培养相关试剂 | 第85页 |
·透射电子显微镜观察样品制备相关试剂 | 第85页 |
·主要仪器及设备 | 第85-86页 |
2 方法 | 第86-87页 |
·原代单层鸭胚成纤维细胞的制备 | 第86页 |
·NGVEV感染DEF细胞及采样 | 第86页 |
·透射电镜样品准备及操作方法 | 第86-87页 |
·透射电镜样品制备的具体步骤 | 第86页 |
·超薄切片和染色 | 第86页 |
·观察和记录 | 第86-87页 |
3 结果 | 第87-93页 |
·电镜下NGVEV病毒粒子的确认和形态特征 | 第87页 |
·NGVEV在感染细胞内的形态发生过程 | 第87-88页 |
·NGVEV的胞浆包涵体结构 | 第88页 |
·被NGVEV感染的DEF细胞的超微结构变化 | 第88-92页 |
·线粒体的固缩变化 | 第88-89页 |
·细胞浆中不规则的电子致密物质 | 第89-91页 |
·细胞浆的粗面内质网扩张 | 第91-92页 |
·细胞浆内空泡的形成 | 第92页 |
·NGVEV致DEF细胞凋亡现象 | 第92-93页 |
4 讨论 | 第93-95页 |
·NGVEV在DEF细胞中的形态特征和形态发生过程 | 第93-94页 |
·NGVEV的胞浆包涵体结构 | 第94页 |
·NGVEV致DEF细胞线粒体的固缩和异常聚集变化 | 第94-95页 |
5 小结 | 第95-97页 |
第六章 雏鹅新型病毒性肠炎病毒CN强毒株致鸭胚成纤维细胞凋亡的相关研究 | 第97-115页 |
1 材料 | 第97-100页 |
·毒株 | 第97-98页 |
·试验鸭胚 | 第98页 |
·主要试剂及配制 | 第98-99页 |
·细胞培养相关试剂 | 第98页 |
·光学显微镜观察细胞凋亡的相关试剂 | 第98页 |
·透射电子显微镜观察细胞凋亡的相关试剂 | 第98页 |
·DNA提取及电泳试剂 | 第98-99页 |
·Annexin V-FITC/PI双标记试剂盒 | 第99页 |
·主要仪器及设备 | 第99页 |
·器材 | 第99-100页 |
2 方法 | 第100-102页 |
·鸭胚成纤维细胞体外培养 | 第100页 |
·光学显微镜观察 | 第100页 |
·透射电镜观察 | 第100-101页 |
·制样 | 第100页 |
·超薄切片和染色 | 第100页 |
·观察和记录 | 第100-101页 |
·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第101页 |
·Annexin V-FITC/PI双标记的流式细胞仪检测 | 第101页 |
·Annexin V-FITC/PI双标记的荧光显微镜观察 | 第101-102页 |
3 结果 | 第102-110页 |
·HE染色法的光镜观察 | 第102-103页 |
·透射电子显微镜观察 | 第103-105页 |
·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第105页 |
·Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪检测 | 第105-108页 |
·Annexin V-FITC/PI双标记的荧光显微镜观察 | 第108-110页 |
4 讨论 | 第110-112页 |
·NGVEV致DEF细胞凋亡 | 第110-111页 |
·NGVEV致DEF细胞凋亡的形态学观察 | 第111页 |
·细胞凋亡与细胞病变的关系 | 第111-112页 |
·NGVEV致DEF细胞凋亡的意义 | 第112页 |
5 小结 | 第112-115页 |
第七章 雏鹅新型病毒性肠炎病毒的提纯、负染超微结构观察和兔抗NGVEV高免血清IgG的制备 | 第115-131页 |
1 材料 | 第115-118页 |
·毒株 | 第115页 |
·试验鸭胚 | 第115页 |
·主要试剂及配制 | 第115-117页 |
·细胞培养相关试剂 | 第115页 |
·CsCl密度梯度离心相关试剂配制 | 第115页 |
·负染电镜相关试剂 | 第115-116页 |
·SDS-PAGE试剂的配制 | 第116-117页 |
·马斯亮兰染色的配制 | 第117页 |
·琼脂板的制备 | 第117页 |
·抗原制备及抗体纯化的相关试剂 | 第117页 |
·主要仪器及设备 | 第117-118页 |
·器材 | 第118页 |
2 方法 | 第118-121页 |
·病毒增殖 | 第118页 |
·经鸭胚尿囊腔增殖 | 第118页 |
·经体外培养的鸭胚成纤维细胞增殖 | 第118页 |
·NGVEV的提纯方法 | 第118-119页 |
·沉淀法纯化病毒 | 第118页 |
·差速离心法纯化病毒 | 第118页 |
·CsCl密度梯度和等密度超速离心纯化病毒 | 第118-119页 |
·应用透射电镜对NGVEV超微结构进行负染观察 | 第119页 |
·兔抗NGVEV高免血清的制备 | 第119-121页 |
·病毒蛋白含量的测定(Bradford法) | 第119-120页 |
·差速离心法纯化病毒 | 第120页 |
·NGVEV免疫抗原的制备 | 第120页 |
·抗体效价的检测 | 第120页 |
·兔抗NGVEV血清IgG的提取和纯化 | 第120-121页 |
·兔抗NGVEV血清IgG蛋白含量的测定 | 第121页 |
·兔抗NGVEV血清IgG纯度的检测 | 第121页 |
3 结果 | 第121-128页 |
·NGVEV在鸭胚及DEF细胞的增殖情况 | 第121-122页 |
·不同纯化方法的结果 | 第122-126页 |
·沉淀法纯化病毒 | 第122页 |
·差速离心法纯化病毒 | 第122页 |
·CsCl不连续密度梯度和等密度超速离心纯化病毒 | 第122-126页 |
·兔抗NGVEV高免血清的制备 | 第126-128页 |
·免疫兔子的抗原的浓度 | 第126页 |
·抗体效价检测 | 第126页 |
·兔抗NGVEV血清IgG的纯化 | 第126-128页 |
4 讨论 | 第128-130页 |
·关于NGVEV的提纯 | 第128-129页 |
·完整NGVEV粒子与不完整NGVEV粒子 | 第129页 |
·兔抗NGVEV高免血清IgG的纯化 | 第129-130页 |
5 小结 | 第130-131页 |
第八章 利用免疫组化SP法对雏鹅新型病毒性肠炎病毒感染雏鹅的侵染规律研究 | 第131-155页 |
1 材料 | 第131-133页 |
·毒株 | 第131页 |
·试验动物 | 第131-132页 |
·主要试剂及配制 | 第132页 |
·组织固定液 | 第132页 |
·脱水剂 | 第132页 |
·组织包埋剂 | 第132页 |
·APES粘片剂 | 第132页 |
·苏木素染染色剂 | 第132页 |
·免疫组化染色试剂 | 第132页 |
·主要仪器及设备 | 第132-133页 |
·器材 | 第133页 |
2 方法 | 第133-137页 |
·NGVEV的增殖及兔抗NGVEV的IgG制备 | 第133页 |
·病理模型的构建 | 第133-134页 |
·人工感染NGVEV雏鹅的组织材料的采集 | 第134页 |
·载玻片和盖玻片的处理 | 第134页 |
·免疫组化检测材料的固定、包埋和切片 | 第134-135页 |
·免疫组化检测雏鹅新型病毒性肠炎病毒方法的建立及优化 | 第135-137页 |
·免疫组化SP法检测NGVEV方法的条件优化 | 第135页 |
·特异性试验 | 第135-136页 |
·重复性和稳定性实验 | 第136页 |
·免疫组化SP法染色程序 | 第136页 |
·结果的判定 | 第136-137页 |
3 结果 | 第137-151页 |
·雏鹅人工急性感染NGVE-CN强毒的临床症状 | 第137页 |
·雏鹅人工急性感染NGVE-CN强毒的大体病变 | 第137-139页 |
·免疫组化SP染色方法的建立和优化 | 第139-140页 |
·特异性实验结果 | 第140页 |
·重复性和稳定性实验结果 | 第140-141页 |
·应用免疫组织化学SP法检测NGVEV在感染鹅各组织中的定位及动态分布 | 第141-150页 |
·NGVEV在感染雏鹅的免疫器官的定位及动态分布 | 第142-145页 |
·NGVEV在感染雏鹅的消化器官的定位及动态分布 | 第145-149页 |
·NGVEV在感染雏鹅的其他器官的定位及动态分布 | 第149-150页 |
·应用免疫组织化学SP法检测NGVEV在死亡鹅组织中的定位及动态分布 | 第150-151页 |
4 讨论 | 第151-154页 |
·免疫组织化学染色法检测NGVEV的建立与优化 | 第151-152页 |
·NGVEV侵染鹅免疫器官的意义 | 第152-153页 |
·NGVEV侵染鹅消化器官的意义 | 第153-154页 |
5 小结 | 第154-155页 |
第九章 利用免疫荧光抗体法对雏鹅新型病毒性肠炎病毒感染雏鹅的侵染规律研究 | 第155-175页 |
1 材料 | 第155-156页 |
·毒株 | 第155页 |
·试验动物 | 第155页 |
·主要试剂及配制 | 第155-156页 |
·免疫荧光染色试剂 | 第155-156页 |
·称染试剂 | 第156页 |
·其余试剂 | 第156页 |
·主要仪器及设备 | 第156页 |
2 方法 | 第156-158页 |
·NGVEV的增殖及兔抗NGVEV的IgG制备 | 第156页 |
·病理模型的构建 | 第156页 |
·人工感染NGVEV雏鹅的组织材料的采集 | 第156页 |
·载玻片和盖玻片的处理 | 第156页 |
·间接免疫荧光检测材料的固定、包埋和切片 | 第156页 |
·间接免疫荧光检测雏鹅新型病毒性肠炎病毒方法的建立及优化 | 第156-158页 |
·间接免疫荧光检测NGVEV条件的优化 | 第156-157页 |
·特异性试验 | 第157-158页 |
·间接免疫荧光法检测石蜡切片中NGVEV的染色程序 | 第158页 |
·免疫荧光染色结果判定 | 第158页 |
3 结果 | 第158-169页 |
·免疫荧光染色方法的建立和优化结果 | 第158-160页 |
·特异性实验结果 | 第160页 |
·应用间接免疫荧光检测NGVEV在感染鹅组织中的定位及动态分布 | 第160-168页 |
·应用间接免疫荧光检测NGVEV在死亡鹅组织中的定位及动态分布 | 第168-169页 |
4 讨论 | 第169-172页 |
·关于荧光抗体技术的应用和优化 | 第169-171页 |
·免疫荧光法和免疫组化SP法检测NGVEV的比较 | 第171页 |
·NGVEV的组织嗜性及分布规律 | 第171-172页 |
·其他腺病毒的感染和组织嗜性 | 第172页 |
5 小结 | 第172-175页 |
第十章 雏鹅新型病毒性肠炎病毒CN强毒株致雏鹅宿主细胞凋亡的研究 | 第175-197页 |
1 材料 | 第175-177页 |
·毒株 | 第175页 |
·试验动物 | 第175页 |
·主要试剂及配制 | 第175-177页 |
·光学显微镜观察细胞凋亡的相关试剂 | 第175-176页 |
·透射电子显微镜观察细胞凋亡的试剂 | 第176页 |
·DNA提取及电泳试剂 | 第176页 |
·TUNEL法检测相关试剂 | 第176-177页 |
·其它常规试剂 | 第177页 |
·主要仪器及设备 | 第177页 |
·器材 | 第177页 |
2 方法 | 第177-180页 |
·试验鹅的人工感染及组织样品的采集 | 第177-178页 |
·HE染色的光学显微镜观察 | 第178-179页 |
·透射电子显微镜观察 | 第179页 |
·琼脂糖凝胶电泳检测宿主细胞DNA Ladder | 第179页 |
·TUNEL法检测细胞凋亡 | 第179-180页 |
3 结果 | 第180-192页 |
·HE染色的可见光显微镜观察凋亡细胞的形态学变化 | 第180-181页 |
·透射电子显微镜观察凋亡细胞的超微形态学变化 | 第181-187页 |
·DNA Ladder检测 | 第187-188页 |
·TUNEL法检测 | 第188-192页 |
4 讨论 | 第192-195页 |
·细胞凋亡的检测方法 | 第192-194页 |
·NGVEV感染与宿主鹅的细胞凋亡 | 第194-195页 |
5 小结 | 第195-197页 |
第十一章 雏鹅新型病毒性肠炎病毒灭活疫苗对青年鹅的免疫原性研究及重组GOIL-2对疫苗的佐剂效应研究 | 第197-217页 |
1 材料 | 第197-199页 |
·毒株及佐剂 | 第197页 |
·试验青年鹅及鸭胚 | 第197页 |
·主要试剂及配制 | 第197-198页 |
·MTT相关溶液的配制 | 第197-198页 |
·ELISA相关溶液的配制 | 第198页 |
·中和实验相关试剂 | 第198页 |
·主要仪器及设备 | 第198-199页 |
·器材 | 第199页 |
2 方法 | 第199-202页 |
·NGVEV灭活疫苗的制备 | 第199页 |
·28日龄青年鹅的分组免疫程序及血样采集 | 第199-200页 |
·细胞免疫水平检测 | 第200页 |
·外周血淋巴细胞的分离 | 第200页 |
·淋巴细胞的诱导培养 | 第200页 |
·样品检测及数据处理 | 第200页 |
·体液免疫水平检测 | 第200-202页 |
·间接ELISA实验 | 第200-201页 |
·中和抗体水平检测 | 第201-202页 |
3 结果 | 第202-212页 |
·被疫苗免疫青年鹅的健康状况 | 第202页 |
·NGVEV强毒株的TCID_(50)测定 | 第202页 |
·抗原包被浓度和鹅血清稀释度的确定 | 第202-203页 |
·HRP酶标兔抗鹅二抗工作浓度的确定 | 第203页 |
·疫苗免疫青年鹅后淋巴细胞增殖试验结果 | 第203-206页 |
·不同剂量的NGVEV灭活疫苗免疫青年鹅后淋巴细胞增殖试验结果 | 第203-204页 |
·辅佐不同剂量GoIL-2的NGVEV灭活疫苗免疫青年鹅后淋巴细胞增殖试验结果 | 第204-205页 |
·NGVEV灭活疫苗与辅佐GoIL-2的NGVEV灭活疫苗免疫青年鹅后淋巴细胞增殖试验结果的比较 | 第205-206页 |
·被疫苗免疫青年鹅的血清IgG水平检测结果 | 第206-209页 |
·不同剂量的NGVEV灭活疫苗免疫青年鹅后血清抗NGVEV的IgG水平的检测结果 | 第206-207页 |
·辅佐不同剂量GoIL-2的NGVEV灭活疫苗免疫青年鹅后血清抗NGVEV-IgG水平的检测结果 | 第207-208页 |
·NGVEV灭活疫苗与辅佐GoIL-2的NGVEV灭活疫苗免疫青年鹅后血清抗NGVEV的IgG水平的检测结果的比较 | 第208-209页 |
·被疫苗免疫的青年鹅中和抗体水平的检测结果 | 第209-212页 |
·不同剂量NGVEV灭活疫苗免疫青年鹅的中和抗体水平检测结果 | 第209-210页 |
·辅佐不同剂量GoIL-2的NGVEV灭活疫苗免疫青年鹅的中和抗体水平检测结果 | 第210-211页 |
·NGVEV灭活疫苗与辅佐GoIL-2 NGVEV灭活疫苗免疫青年鹅的中和抗体水平检测结果的比较 | 第211-212页 |
4 讨论 | 第212-216页 |
·NGVEV灭活疫苗对青年鹅的细胞免疫效果 | 第212-213页 |
·NGVEV灭活疫苗对青年鹅的体液免疫效果 | 第213-214页 |
·GoIL-2对疫苗诱导的细胞免疫及体液免疫反应的影响 | 第214-216页 |
5 小结 | 第216-217页 |
第十二章 雏鹅新型病毒性肠炎病毒灭活疫苗在开产前种鹅的免疫效果评价 | 第217-229页 |
1 材料 | 第217-218页 |
·毒株及佐剂 | 第217页 |
·试验种鹅 | 第217页 |
·主要试剂及配制 | 第217页 |
·主要仪器及设备 | 第217-218页 |
·器材 | 第218页 |
2 方法 | 第218-219页 |
·开产前鹅的分组免疫程序及样品的采集 | 第218页 |
·卵黄的收集及处理方法 | 第218页 |
·细胞免疫水平检测 | 第218-219页 |
·体液免疫水平检测 | 第219页 |
·后代雏鹅的攻毒免疫保护力测定 | 第219页 |
3 结果 | 第219-226页 |
·被免疫种鹅的健康状况 | 第219页 |
·被免疫种鹅的淋巴细胞增殖试验检测结果 | 第219-220页 |
·被免疫种鹅的血清IgG水平检测结果 | 第220-221页 |
·被免疫种鹅的血清中和抗体水平检测结果 | 第221-222页 |
·被免疫种鹅的卵黄抗NGVEV的IgG水平检测结果 | 第222-223页 |
·被免疫种鹅的卵黄中和抗体水平的检测结果 | 第223-224页 |
·被免疫种鹅的后代雏鹅攻毒保护实验结果 | 第224-226页 |
4 讨论 | 第226-228页 |
5 小结 | 第228-229页 |
第三部分 结论 | 第229-233页 |
第四部分 参考文献 | 第233-263页 |
致谢 | 第263-264页 |
作者简介 | 第264页 |
攻读博士学位期间以第一作者身份发表的论文 | 第264-265页 |
攻读博士学位期间以非第一作者身份发表的论文 | 第265页 |