| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-36页 |
| ·植物在各种非生物逆境胁迫下的应答、调节途径 | 第17-18页 |
| ·植物体内非生物胁迫信号传递的一般途径 | 第17-18页 |
| ·植物抗逆过程相关的功能基因 | 第18-20页 |
| ·Na~+/H~+转运蛋白基因 | 第18页 |
| ·渗透调节相关基因 | 第18-20页 |
| ·细胞抗氧化相关基因 | 第20页 |
| ·水通道蛋白 | 第20页 |
| ·植物抗逆境信号过程中的调节基因 | 第20-35页 |
| ·信号转导相关基因 | 第20-31页 |
| ·逆境相关的转录因子 | 第31-35页 |
| ·立题依据和研究意义 | 第35-36页 |
| 第二章 油菜高盐、干旱胁迫应答基因分离鉴定和表达分析 | 第36-52页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·植物材料 | 第36页 |
| ·菌种和质粒 | 第36页 |
| ·化学试剂及其它材料 | 第36页 |
| ·常用培养基 | 第36页 |
| ·PCR扩增引物及试剂 | 第36-37页 |
| ·实验器材 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-42页 |
| ·油菜无菌苗的培养及材料的收取 | 第37页 |
| ·cDNA分离以及Macroarray分析 | 第37-38页 |
| ·DNA测序分析 | 第38页 |
| ·油菜总RNA提取、纯化以及逆转录反应 | 第38-40页 |
| ·实时定量RT-PCR分析 | 第40-42页 |
| ·结果 | 第42-49页 |
| ·油菜中高盐、干旱胁迫应答基因的筛选和鉴定 | 第42-45页 |
| ·13个基因在高盐、干旱胁迫下的表达模式 | 第45-47页 |
| ·6个基因在ABA处理下的表达模式 | 第47-48页 |
| ·13个基因的组织表达表达模式 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 油菜冷调节基因BnCOR25的功能鉴定 | 第52-69页 |
| ·实验材料 | 第52-54页 |
| ·植物材料 | 第52页 |
| ·菌株和载体 | 第52页 |
| ·化学试剂及其他材料 | 第52页 |
| ·工具酶 | 第52页 |
| ·常用储液以及酵母培养所需储液 | 第52页 |
| ·常用缓冲液 | 第52页 |
| ·培养基 | 第52-53页 |
| ·Northern杂交所用试剂 | 第53页 |
| ·PCR分析扩增试剂 | 第53-54页 |
| ·DNA测序 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-59页 |
| ·拟南芥的培养以及农杆菌介导的遗传转化 | 第54-55页 |
| ·拟南芥gDNA的提取 | 第55页 |
| ·拟南芥总RNA的提取、纯化以及逆转录 | 第55页 |
| ·Northern杂交 | 第55-57页 |
| ·BnCOR25:eGFP载体构建 | 第57-58页 |
| ·酵母转化、培养及抗冷性分析 | 第58-59页 |
| ·转基因拟南芥抗冷性分析 | 第59页 |
| ·结果 | 第59-66页 |
| ·BnCOR25基因的分离和鉴定 | 第59-60页 |
| ·BnCOR25基因的组织表达 | 第60-61页 |
| ·BnCOR25基因的表达受到渗透胁迫和冷的显著诱导 | 第61页 |
| ·BnCOR25基因的表达依赖于ABA的信号通路 | 第61-62页 |
| ·BnCOR25蛋白的亚细胞定位 | 第62-63页 |
| ·裂殖酵母(S.pombe)细胞中过量表达BnCOR25基因增强了酵母细胞对冷胁迫的耐受性 | 第63-65页 |
| ·BnCOR25过量表达的转基因拟南芥增强了对冷的耐受性 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-69页 |
| 第四章 油菜BnCIPK6参与非生物胁迫和激素的应答 | 第69-100页 |
| ·实验材料 | 第69页 |
| ·植物材料 | 第69页 |
| ·菌株和载体 | 第69页 |
| ·化学试剂及其他材料 | 第69页 |
| ·工具酶 | 第69页 |
| ·常用储液和常用缓冲液 | 第69页 |
| ·常用培养基 | 第69页 |
| ·方法 | 第69-77页 |
| ·生物信息学相关网站 | 第69页 |
| ·油菜无菌苗的培养、各种胁迫处理及材料的收取 | 第69页 |
| ·油菜和拟南芥RNA提取、纯化及逆转录 | 第69页 |
| ·实时定量RT-PCR | 第69-70页 |
| ·BnCIPK6:eGFP载体构建 | 第70页 |
| ·Genome Walker PCR方法调取BnCIPK6启动子 | 第70-71页 |
| ·proBnCIPK6/AtCIPK6-GUS融合载体的构建及拟南芥的转化 | 第71页 |
| ·proBnCIPK6/AtCIPK6-GUS的转基因拟南芥的GUS染色分析 | 第71页 |
| ·BnCIPK6和BnCIPK6(M)原核表达载体的构建和MBP融合蛋白的表达纯化 | 第71-74页 |
| ·BnCIPK6-MBP和BnCIPK6(M)-MBP蛋白的体外磷酸化 | 第74页 |
| ·BnCIPK6和BnCIPK6(M)过量表达载体的构建及转基因拟南芥的功能鉴定 | 第74-75页 |
| ·ABA相关Marker基因的RT-PCR分析 | 第75-76页 |
| ·cipk6突变体的鉴定及表型鉴定 | 第76-77页 |
| ·结果 | 第77-96页 |
| ·BnCIPK6基因的分离和鉴定 | 第77-78页 |
| ·BnCIPK6基因的表达受到高盐胁迫、渗透胁迫、低磷胁迫、ABA和BL的诱导 | 第78-80页 |
| ·BnCIPK6基因启动子的分离及其表达模式 | 第80-82页 |
| ·BnCIPK6蛋白的亚细胞定位 | 第82-84页 |
| ·BnCIPK6蛋白的子磷酸化能力(酶的活性)分析 | 第84页 |
| ·BnCIPK6和BnCIPK6(M)过量表达转基因拟南芥的功能鉴定 | 第84-91页 |
| ·拟南芥CIPK6的表达分析及功能鉴定 | 第91-95页 |
| ·在拟南芥Atmkk1 T-DNA插入突变体中分析AtCIPK6的表达 | 第95-96页 |
| ·讨论 | 第96-100页 |
| 第五章 BnCIPK6相互作用蛋白的筛选与鉴定 | 第100-116页 |
| ·引言 | 第100-101页 |
| ·实验材料 | 第101-103页 |
| ·植物材料 | 第101页 |
| ·菌株与质粒 | 第101页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第101页 |
| ·化学试剂 | 第101-103页 |
| ·实验方法 | 第103-109页 |
| ·酵母双杂交质粒pGBKT7-BnCIPK6和10个拟南芥CBL的pADKT7载体的构建 | 第103-104页 |
| ·质粒转化酵母宿主细胞 | 第104页 |
| ·诱饵蛋白自激活及毒性检测 | 第104-105页 |
| ·油菜酵母双杂交cDNA文库构建 | 第105页 |
| ·酵母结合实验筛选互作蛋白 | 第105-106页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第106页 |
| ·互作蛋白的分析 | 第106-107页 |
| ·BiFC验证分析BnCIPK6和BnCBL1的相互作用 | 第107-109页 |
| ·结果 | 第109-113页 |
| ·pGBKT7-BnCIPK6和10个拟南芥CBL的pGADKT7载体的构建 | 第109页 |
| ·pGBKT7-BnCIPK6融合蛋白的自激活和毒性检测 | 第109页 |
| ·BnCIPK6与10个拟南芥的CBL的相互作用分析 | 第109-110页 |
| ·从油菜酵母双杂交cDNA文库中筛选与BnCIPK6相互作用的蛋白 | 第110-113页 |
| ·植物细胞中分析BnCIPK6和BnCBL1蛋白之间的相互作用 | 第113页 |
| ·讨论 | 第113-116页 |
| ·酵母双杂交技术的应用 | 第113-114页 |
| ·BnCIPK6蛋白和拟南芥CBL蛋白之间的相互作用 | 第114页 |
| ·BnCIPK6蛋白相互作用蛋白的筛选 | 第114-116页 |
| 第六章 油菜BnCBL1基因的表达与功能鉴定 | 第116-124页 |
| ·实验材料 | 第116页 |
| ·植物材料 | 第116页 |
| ·菌株和载体 | 第116页 |
| ·化学试剂及其他材料 | 第116页 |
| ·工具酶 | 第116页 |
| ·常用储液和常用缓冲液 | 第116页 |
| ·常用培养基 | 第116页 |
| ·方法 | 第116-118页 |
| ·油菜无菌苗的培养、材料的收取及各种胁迫处理 | 第116页 |
| ·油菜和拟南芥RNA提取、纯化及逆转录 | 第116页 |
| ·实时定量RT-PCR分析BnCBLl基因的表达 | 第116页 |
| ·BnCBL1:eGFP载体构建 | 第116-117页 |
| ·BnCBL1过量表达载体的构建及转基因拟南芥的功能鉴定 | 第117-118页 |
| ·结果 | 第118-122页 |
| ·油菜BnCBL1基因的鉴定 | 第118页 |
| ·油菜BnCBL1基因结构分析 | 第118-119页 |
| ·油菜BnCBL1基因的表达模式分析 | 第119页 |
| ·BnCBL1蛋白的亚细胞定位 | 第119-120页 |
| ·BnCBL1过量表达转基因拟南芥在基因组水平和mRNA表达水平的鉴定 | 第120页 |
| ·BnCBL1过量表达转基因拟南芥增强了对盐胁迫的耐受性 | 第120-121页 |
| ·BnCBL1过量表达转基因拟南芥增强了对低磷胁迫的耐受性 | 第121-122页 |
| ·讨论 | 第122-124页 |
| 结论 | 第124-126页 |
| 本论文的主要创新点 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-143页 |
| 附录 | 第143-146页 |
| 博士期间撰写和发表的学术论文 | 第146-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
