橡胶树炭疽病菌T-DNA插入突变体库的构建及其分子研究
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-24页 |
| ·橡胶树炭疽病的发生与危害 | 第9-10页 |
| ·橡胶树炭疽病田间症状 | 第10-11页 |
| ·田间症状 | 第10-11页 |
| ·橡胶树炭疽病与其它主要叶部病害田间症状比较 | 第11页 |
| ·橡胶树炭疽菌病研究概述 | 第11-17页 |
| ·橡胶树炭疽菌 | 第11-12页 |
| ·橡胶树炭疽病发生规律与流行学研究 | 第12-13页 |
| ·橡胶树炭疽病防治措施 | 第13-14页 |
| ·炭疽病菌病原学研究 | 第14-16页 |
| ·炭疽病菌rDNA-ITS序列分析 | 第16-17页 |
| ·植物病原真菌遗传转化常用方法 | 第17-21页 |
| ·限制酶介导转化法(REMI) | 第17-18页 |
| ·根癌农杆菌介导的真菌遗传转化法(ATMT) | 第18-20页 |
| ·炭疽菌遗传转化研究进展 | 第20-21页 |
| ·植物病原真菌T-DNA插入突变体主要鉴定技术 | 第21-22页 |
| ·PCR检测 | 第21页 |
| ·Southern杂交分析 | 第21-22页 |
| ·Tail-PCR测定 | 第22页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| ·本研究的技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-41页 |
| ·实验材料 | 第24-28页 |
| ·供试橡菌株及质粒 | 第24页 |
| ·供试培养基 | 第24-26页 |
| ·试剂和仪器 | 第26-28页 |
| ·实验方法 | 第28-41页 |
| ·炭疽病菌rDNA-ITS序列分析 | 第28-32页 |
| ·农杆菌介导遗传转化 | 第32-33页 |
| ·转化子库的建立与保存 | 第33页 |
| ·农杆菌介导遗传转化条件的优化 | 第33-34页 |
| ·橡胶树炭疽菌T-DNA插入转化子分子分析 | 第34-38页 |
| ·橡胶树炭疽菌T-DNA插入突变体表型突变筛选 | 第38-39页 |
| ·橡胶树炭疽菌T-DNA插入位点侧翼序列分析 | 第39-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-52页 |
| ·炭疽病菌rDNA-ITS序列分析 | 第41-44页 |
| ·炭疽菌基因组总DNA提取 | 第41页 |
| ·炭疽病菌基因组rDNA-ITS区序列扩增 | 第41页 |
| ·目的片段的回收与克隆 | 第41-42页 |
| ·目的片段的测序与比较分析 | 第42-43页 |
| ·ITS序列聚类分析 | 第43-44页 |
| ·农杆菌介导遗传转化条件的优化 | 第44-47页 |
| ·两种橡胶树炭疽菌对氯嘧黄隆的敏感性测定 | 第44页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)浓度的确定 | 第44-45页 |
| ·最佳转化共培养时间的确定 | 第45页 |
| ·农杆菌诱导时间对转化效率的影响测定 | 第45-46页 |
| ·共培养过程中农杆菌初始浓度对转化效率的影响 | 第46页 |
| ·炭疽菌最佳分生孢子浓度的确定 | 第46-47页 |
| ·共培养温度对转化效率的影响 | 第47页 |
| ·橡胶树炭疽菌T-DNA插入转化子分子分析 | 第47-49页 |
| ·转化子的PCR检测 | 第47-48页 |
| ·炭疽菌转化子的southern杂交分析结果 | 第48-49页 |
| ·炭疽菌T-DNA插入转化子表型突变筛选 | 第49-50页 |
| ·菌落形态变异筛选 | 第49页 |
| ·生长速度变化筛选 | 第49页 |
| ·产孢能力变化筛选 | 第49-50页 |
| ·侵染能力改变筛选 | 第50页 |
| ·致病力改变筛选 | 第50页 |
| ·橡胶树炭疽菌T-DNA插入位点侧翼序列分析 | 第50-52页 |
| ·突变体HCGHN4-56左臂插入位点 | 第50-51页 |
| ·突变体HCGHN4-182左臂插入位点 | 第51页 |
| ·突变体HCGYN12-153左臂插入位点 | 第51页 |
| ·突变体HCGYN12-392左臂插入位点 | 第51-52页 |
| 4 讨论与结论 | 第52-55页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·结论 | 第53-54页 |
| ·下一步研究计划 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附图 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
