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NRAS细胞膜转移抑制剂的发现及机制研究

摘要第3-4页
Abstract第4页
前言第7-13页
1. 实验材料第13-20页
    1.1 主要细胞系第13页
    1.2 化合物库及化合物第13-14页
    1.3 生化与分子细胞生物学试剂第14-15页
    1.4 主要溶液配方第15-18页
    1.5 主要仪器设备第18-19页
    1.6 PCR引物设计与合成第19-20页
2. 实验方法第20-40页
    2.1 细胞培养第20-21页
    2.2 RAS转化细胞的构建第21-22页
    2.3 化合物筛选第22-24页
    2.4 细胞增殖曲线第24-25页
    2.5 细胞增殖形态观察第25页
    2.6 细胞Brd U增殖实验第25-26页
    2.7 Western Blot实验第26-27页
    2.8 免疫荧光实验第27-28页
    2.9 PI细胞周期实验第28页
    2.10 细胞离心涂片及瑞氏染色第28-29页
    2.11 细胞凋亡实验第29-30页
    2.12 基因表达谱芯片实验第30页
    2.13 活细胞动态观察第30-31页
    2.14 膜蛋白抽提第31-32页
    2.15 ABE实验第32-35页
    2.16 细胞透射电子显微镜第35-36页
    2.17 Rho蛋白活化检测实验第36-37页
    2.18 si RNA筛选实验第37-38页
    2.19 图像拍摄及处理第38-39页
    2.20 统计学方法第39-40页
3. 实验结果第40-85页
    3.1 靶向RAS通路的细胞生物学水平高通量筛选系统的建立及验证第40-42页
        3.1.1 筛选细胞系的建立第40-41页
        3.1.2 通过筛选FDA药物库筛选,验证了他汀类化合物对RAS突变型细胞的抑制作用第41-42页
    3.2 NRAS及KRAS4A细胞膜定位抑制分子NADA的筛选第42-73页
        3.2.1 初级筛选获得活性脂类化合物分子PDA、ODA和NADA第42-44页
        3.2.2 NADA的RAS转化抑制作用具有结构特异性且不依赖其生理活性第44-45页
        3.2.3 NADA引起Ba/F3-N细胞胀亡第45-49页
        3.2.4 NADA对NRAS转化细胞具有选择性抑制作用第49-50页
        3.2.5 NADA对NRAS信号通路的影响第50-53页
        3.2.6 NADA可以阻滞NRAS和KRAS4A的细胞质膜定位第53-56页
        3.2.7 NADA引起NRAS从细胞质膜到高尔基体膜的重新定位第56-61页
        3.2.8 NADA引起高尔基体及内体的形态变化第61-64页
        3.2.9 NADA能抑制细胞分泌功能第64-68页
        3.2.10 NADA不影响细胞的骨架变化和膜泡运动调控通路Rho第68-71页
        3.2.11 通过si RNA筛选膜泡转运相关基因鉴定NADA可能的作用分子第71-73页
    3.3 新激酶抑制剂分子库的筛选第73-85页
        3.3.1 新激酶抑制剂化合物库筛选第73-77页
        3.3.2 化合物999#可能通过干扰微管功能抑制细胞增殖第77-85页
4. 讨论第85-90页
结论第90-91页
参考文献第91-102页
致谢第102-105页
学术论文和科研成果目录第105-107页

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