| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 前言 | 第7-13页 |
| 1. 实验材料 | 第13-20页 |
| 1.1 主要细胞系 | 第13页 |
| 1.2 化合物库及化合物 | 第13-14页 |
| 1.3 生化与分子细胞生物学试剂 | 第14-15页 |
| 1.4 主要溶液配方 | 第15-18页 |
| 1.5 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 1.6 PCR引物设计与合成 | 第19-20页 |
| 2. 实验方法 | 第20-40页 |
| 2.1 细胞培养 | 第20-21页 |
| 2.2 RAS转化细胞的构建 | 第21-22页 |
| 2.3 化合物筛选 | 第22-24页 |
| 2.4 细胞增殖曲线 | 第24-25页 |
| 2.5 细胞增殖形态观察 | 第25页 |
| 2.6 细胞Brd U增殖实验 | 第25-26页 |
| 2.7 Western Blot实验 | 第26-27页 |
| 2.8 免疫荧光实验 | 第27-28页 |
| 2.9 PI细胞周期实验 | 第28页 |
| 2.10 细胞离心涂片及瑞氏染色 | 第28-29页 |
| 2.11 细胞凋亡实验 | 第29-30页 |
| 2.12 基因表达谱芯片实验 | 第30页 |
| 2.13 活细胞动态观察 | 第30-31页 |
| 2.14 膜蛋白抽提 | 第31-32页 |
| 2.15 ABE实验 | 第32-35页 |
| 2.16 细胞透射电子显微镜 | 第35-36页 |
| 2.17 Rho蛋白活化检测实验 | 第36-37页 |
| 2.18 si RNA筛选实验 | 第37-38页 |
| 2.19 图像拍摄及处理 | 第38-39页 |
| 2.20 统计学方法 | 第39-40页 |
| 3. 实验结果 | 第40-85页 |
| 3.1 靶向RAS通路的细胞生物学水平高通量筛选系统的建立及验证 | 第40-42页 |
| 3.1.1 筛选细胞系的建立 | 第40-41页 |
| 3.1.2 通过筛选FDA药物库筛选，验证了他汀类化合物对RAS突变型细胞的抑制作用 | 第41-42页 |
| 3.2 NRAS及KRAS4A细胞膜定位抑制分子NADA的筛选 | 第42-73页 |
| 3.2.1 初级筛选获得活性脂类化合物分子PDA、ODA和NADA | 第42-44页 |
| 3.2.2 NADA的RAS转化抑制作用具有结构特异性且不依赖其生理活性 | 第44-45页 |
| 3.2.3 NADA引起Ba/F3-N细胞胀亡 | 第45-49页 |
| 3.2.4 NADA对NRAS转化细胞具有选择性抑制作用 | 第49-50页 |
| 3.2.5 NADA对NRAS信号通路的影响 | 第50-53页 |
| 3.2.6 NADA可以阻滞NRAS和KRAS4A的细胞质膜定位 | 第53-56页 |
| 3.2.7 NADA引起NRAS从细胞质膜到高尔基体膜的重新定位 | 第56-61页 |
| 3.2.8 NADA引起高尔基体及内体的形态变化 | 第61-64页 |
| 3.2.9 NADA能抑制细胞分泌功能 | 第64-68页 |
| 3.2.10 NADA不影响细胞的骨架变化和膜泡运动调控通路Rho | 第68-71页 |
| 3.2.11 通过si RNA筛选膜泡转运相关基因鉴定NADA可能的作用分子 | 第71-73页 |
| 3.3 新激酶抑制剂分子库的筛选 | 第73-85页 |
| 3.3.1 新激酶抑制剂化合物库筛选 | 第73-77页 |
| 3.3.2 化合物999#可能通过干扰微管功能抑制细胞增殖 | 第77-85页 |
| 4. 讨论 | 第85-90页 |
| 结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-102页 |
| 致谢 | 第102-105页 |
| 学术论文和科研成果目录 | 第105-107页 |
