| 摘要 | 第4-9页 |
| Abstract | 第9-15页 |
| 中英文缩略字 | 第24-25页 |
| 引言 | 第25-27页 |
| 第一部分 确定经典Wnt信号通路关键基因在DPN患者中表达情况的变化 | 第27-35页 |
| 1 材料、仪器和试剂 | 第27-28页 |
| 1.1 实验血液标本收集 | 第27页 |
| 1.2 血液标本实验主要试剂使用 | 第27页 |
| 1.3 血液标本实验主要仪器使用 | 第27-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.1 血液样本总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2 反转录c DNA第一链的合成 | 第29页 |
| 2.3 Real-Time PCR检测经典Wnt信号通路相关基因 | 第29-30页 |
| 2.4 引物设计 | 第30页 |
| 2.5 引物稀释 | 第30-31页 |
| 3 统计学方法 | 第31页 |
| 4 结果 | 第31-33页 |
| 4.1 经典Wnt通路下游基因在糖尿病人群外周血液中表达降低,负性调控因子表达升高 | 第31-32页 |
| 4.2 经典Wnt通路关键基因表达水平与糖尿病人群Hb A1c显著相关 | 第32-33页 |
| 5 讨论 | 第33-34页 |
| 6 结论 | 第34-35页 |
| 第二部分 探究体内抑制经典Wnt信号通路对DPN发生的影响 | 第35-47页 |
| 1 材料、仪器和试剂 | 第35-36页 |
| 1.1 实验动物 | 第35页 |
| 1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 1.3 主要仪器 | 第35-36页 |
| 2 实验方法 | 第36-40页 |
| 2.1 制备T2DM小鼠模型 | 第36-37页 |
| 2.2 小鼠一般情况、血糖及体重的监测 | 第37页 |
| 2.3 小鼠后肢痛觉检测 | 第37页 |
| 2.4 运动能力的检测 | 第37-38页 |
| 2.5 实验动物取材 | 第38页 |
| 2.6 小鼠肝脏冰冻切片油红O染色 | 第38页 |
| 2.7 小鼠血清学指标的检测 | 第38-40页 |
| 2.7.1 Elisa法检测血清胰岛素浓度 | 第38-39页 |
| 2.7.2 稳态模型评估的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）的计算： | 第39页 |
| 2.7.3 GPO-PAP酶法检测血甘油三酯浓度 | 第39页 |
| 2.7.4 COD-PAP法检测血胆固醇浓度 | 第39页 |
| 2.7.5 双试剂直接法检测高密度脂蛋白浓度 | 第39-40页 |
| 2.7.6 双试剂直接法检测低密度脂蛋白浓度 | 第40页 |
| 2.7.7 酶比色微板法检测总胆汁酸浓度 | 第40页 |
| 3 统计学方法 | 第40-41页 |
| 4 结果 | 第41-45页 |
| 4.1 体内抑制经典Wnt通路后小鼠体重降低、肝重增加 | 第41页 |
| 4.2 体内抑制经典Wnt通路后小鼠血糖及血脂升高 | 第41-43页 |
| 4.3 体内抑制经典Wnt通路后小鼠肝脏脂质代谢异常 | 第43-44页 |
| 4.4 体内抑制经典Wnt通路后小鼠足底热刺痛反应迟钝、运动耐力下降 | 第44-45页 |
| 5 讨论 | 第45-46页 |
| 6 结论 | 第46-47页 |
| 第三部分 揭示抑制经典Wnt信号通路促进DPN发生的分子机制 | 第47-76页 |
| 1 材料、仪器和试剂 | 第47-52页 |
| 1.1 主要试剂 | 第47页 |
| 1.2 主要试剂配制 | 第47-51页 |
| 1.2.1 5mol/L NaOH溶液的配制 | 第47页 |
| 1.2.2 1mol/L Tris-HCl溶液的配制 | 第47-48页 |
| 1.2.3 1mol/L Tris-HCl（pH=6.8）200mL | 第48页 |
| 1.2.4 1.5mol/L Tris-HCl（p H=8.8）200mL | 第48页 |
| 1.2.5 4ⅹLoading Sample Buffer 20mL | 第48页 |
| 1.2.6 10%SDS 10mL | 第48-49页 |
| 1.2.7 10%APS 1mL | 第49页 |
| 1.2.8 10ⅹ电泳缓冲液500mL | 第49页 |
| 1.2.9 10ⅹ转膜缓冲液500mL | 第49页 |
| 1.2.10 10ⅹTBS 500mL | 第49-50页 |
| 1.2.11 TBST 500mL | 第50页 |
| 1.2.12 5% milk 50mL | 第50页 |
| 1.2.13 5%BSA 50mL | 第50-51页 |
| 1.2.14 0.5 mol/L EDTA 50mL | 第51页 |
| 1.2.15 组织裂解液配制 | 第51页 |
| 1.3 主要仪器 | 第51-52页 |
| 2 实验方法与步骤 | 第52-61页 |
| 2.1 TRI reagent试剂提取肌肉组织总RNA | 第52页 |
| 2.2 反转录c DNA第一链的合成 | 第52-53页 |
| 2.3 引物设计 | 第53-54页 |
| 2.4 引物稀释 | 第54页 |
| 2.5 Real-Time PCR检测经典Wnt信号通路相关基因 | 第54-55页 |
| 2.6 三组人群外周血基因组DNA提取 | 第55页 |
| 2.7 三组人群外周血线粒体DNA拷贝数检测 | 第55-56页 |
| 2.8 小鼠肌肉组织总DNA提取 | 第56-57页 |
| 2.9 小鼠肌肉组织线粒体DNA拷贝数检测 | 第57页 |
| 2.10 Elisa法检测三组人群血清IL-6 和HIF1α 浓度 | 第57-58页 |
| 2.11 小鼠肌肉组织ATP浓度检测 | 第58页 |
| 2.12 小鼠肌肉组织蛋白样品制备 | 第58-59页 |
| 2.12.1 蛋白提取 | 第58页 |
| 2.12.2 用BCA法检测蛋白浓度 | 第58-59页 |
| 2.12.3 蛋白变性 | 第59页 |
| 2.13 蛋白免疫印迹实验 | 第59-61页 |
| 2.13.1 分离胶和浓缩胶配制 | 第59-60页 |
| 2.13.2 电泳 | 第60页 |
| 2.13.3 转膜 | 第60页 |
| 2.13.4 封闭 | 第60页 |
| 2.13.5 一抗封闭 | 第60-61页 |
| 2.13.6 二抗封闭 | 第61页 |
| 2.13.7 曝片 | 第61页 |
| 2.13.8 蛋白条带分析 | 第61页 |
| 3 统计学分析 | 第61页 |
| 4 结果 | 第61-71页 |
| 4.1 体内抑制经典Wnt通路后Wnt通路关键基因表达降低 | 第61-63页 |
| 4.2 利用生物信息学方法预测影响DPN发生发展的靶基因及分子通路 | 第63-67页 |
| 4.3 糖尿病人群血清中IL-6、HIF-1α 的水平升高且与Hb A1c显著相关 | 第67-68页 |
| 4.4 糖尿病人群外周血mt DNA拷贝数降低且与Hb A1c显著相关 | 第68-69页 |
| 4.5 验证HIF-1 代谢通路影响DPN发生发展的分子机制 | 第69-70页 |
| 4.6 体内抑制经典Wnt通路后小鼠肌肉组织中mt DNA拷贝数及ATP浓度降低 | 第70-71页 |
| 5 讨论 | 第71-75页 |
| 6 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 全文小结 | 第81-82页 |
| 综述 Wnt家族蛋白在糖尿病进程中作用的研究进展 | 第82-93页 |
| 参考文献 | 第88-93页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
