| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 综述 | 第13-21页 |
| 1.1 植物内生菌简介 | 第13页 |
| 1.2 紫杉醇及其现状 | 第13-15页 |
| 1.2.1 紫杉醇及其合成途径简述 | 第13-14页 |
| 1.2.2 紫杉醇资源现状 | 第14-15页 |
| 1.3 产紫杉醇微生物 | 第15-16页 |
| 1.3.1 产紫杉醇内生菌 | 第15页 |
| 1.3.2 基因工程菌株 | 第15-16页 |
| 1.4 真菌紫杉醇合成相关基因的研究 | 第16-19页 |
| 1.5 牻牛儿牻牛儿焦磷酸合成酶和紫杉烷13α-羟化酶 | 第19页 |
| 1.6 本研究内容、目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 候选基因A11450和A02725的筛选及克隆 | 第21-28页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第21页 |
| 2.2.1 研究材料 | 第21页 |
| 2.2.2 主要实验试剂 | 第21页 |
| 2.2.3 主要培养基 | 第21页 |
| 2.3 实验仪器与设备 | 第21-22页 |
| 2.4 实验方法 | 第22-24页 |
| 2.4.1 枝霉MD2基因组DNA的提取 | 第22页 |
| 2.4.2 候选基因的筛选 | 第22-23页 |
| 2.4.3 候选基因A02725 的引物设计 | 第23页 |
| 2.4.4 候选基因 A02725 的克隆 | 第23页 |
| 2.4.5 目标片段的回收 | 第23-24页 |
| 2.4.6 A02725 片段与T载体的连接及转化 | 第24页 |
| 2.4.7 菌液PCR检测及测序 | 第24页 |
| 2.4.8 候选基因的生物信息学分析 | 第24页 |
| 2.5 实验结果 | 第24-26页 |
| 2.5.1 候选基因的筛选及克隆 | 第24-26页 |
| 2.5.2 候选基因A02725的生物信息学分析 | 第26页 |
| 2.6 本章小结 | 第26-28页 |
| 第三章 超表达A11450-转基因菌株的构建及分析 | 第28-48页 |
| 3.1 引言 | 第28页 |
| 3.2 材料与试剂 | 第28-31页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第28页 |
| 3.2.2 实验主要试剂 | 第28页 |
| 3.2.3 培养基 | 第28-29页 |
| 3.2.4 主要抗生素及试剂配制 | 第29-31页 |
| 3.3 主要仪器设备 | 第31页 |
| 3.4 实验方法 | 第31-40页 |
| 3.4.1 候选基因A11450的超表达载体构建及验证 | 第31-34页 |
| 3.4.2 农杆菌介导转化枝霉MD2及转化子的筛选、验证 | 第34-35页 |
| 3.4.3 候选基因A11450的拷贝数分析 | 第35-38页 |
| 3.4.4 候选基因A11450的表达量分析 | 第38-39页 |
| 3.4.5 紫杉烷类的HPLC分析 | 第39-40页 |
| 3.5 实验结果 | 第40-46页 |
| 3.5.1 候选基因A11450超表达载体构建 | 第40-41页 |
| 3.5.2 农杆菌介导的遗传转化及筛选验证 | 第41-42页 |
| 3.5.3 候选基因A11450的拷贝数分析 | 第42-43页 |
| 3.5.4 候选基因A11450的表达量分析 | 第43页 |
| 3.5.5 A11450-转基因菌株紫杉烷类产量分析 | 第43-46页 |
| 3.6 本章小结 | 第46-48页 |
| 第四章 超表达A02725-转基因菌株的构建和分析 | 第48-55页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第48页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第48页 |
| 4.2.2 实验主要试剂 | 第48页 |
| 4.2.3 培养基 | 第48页 |
| 4.2.4 主要抗生素及试剂配制 | 第48页 |
| 4.3 主要仪器设备 | 第48页 |
| 4.4 实验方法 | 第48-50页 |
| 4.4.1 候选基因A02725的超表达载体构建及转化 | 第48-49页 |
| 4.4.2 候选基因A02725的拷贝数及表达量分析 | 第49页 |
| 4.4.3 A02725-转基因菌株的紫杉烷类产量分析 | 第49-50页 |
| 4.5 实验结果 | 第50-54页 |
| 4.5.1 候选基因A02725超表达载体构建 | 第50页 |
| 4.5.2 农杆菌介导的遗传转化及筛选验证 | 第50-52页 |
| 4.5.3 候选基因A02725的拷贝数分析 | 第52-53页 |
| 4.5.4 候选基因A02725的表达量分析 | 第53页 |
| 4.5.5 A02725-转基因菌株紫杉烷类产量分析 | 第53-54页 |
| 4.6 本章小结 | 第54-55页 |
| 第五章 总结与展望 | 第55-57页 |
| 5.1 本文总结 | 第55-56页 |
| 5.2 本文的创新之处 | 第56页 |
| 5.3 展望 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 读硕期间已发表文章和专利 | 第62页 |
