| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 常用中英文缩写词 | 第13-15页 |
| 文献综述 | 第15-27页 |
| 1 猪圆环病毒2型的研究进展 | 第15-20页 |
| 1.1 PCV2病原学的特性 | 第15页 |
| 1.2 PCV2基因组的特征 | 第15-17页 |
| 1.3 PCV2流行病学及致病机制 | 第17-18页 |
| 1.4 PCV2疫苗的研究进展 | 第18-20页 |
| 2 猪细小病毒研究进展 | 第20-24页 |
| 2.1 PPV病原学的特性 | 第20-21页 |
| 2.2 PPV基因组的特征 | 第21-22页 |
| 2.3 PPV流行病学及致病机制 | 第22-23页 |
| 2.4 PPV疫苗的研究进展 | 第23-24页 |
| 3 PPV与PCV2协同感染及其疫苗研制的研究进展 | 第24-27页 |
| 引言 | 第27-29页 |
| 1 材料与方法 | 第29-47页 |
| 1.1 菌株、毒种、细胞及实验动物 | 第29页 |
| 1.2 主要抗体和试剂(盒) | 第29-30页 |
| 1.3 主要试剂及营养液配置 | 第30-34页 |
| 1.3.1 氨苄青霉素母液 | 第30页 |
| 1.3.2 ConA贮存液 | 第30页 |
| 1.3.3 MTT贮存液 | 第30页 |
| 1.3.4 IPTG贮存液 | 第30页 |
| 1.3.5 D-氨基葡萄糖盐酸盐贮存液 | 第30页 |
| 1.3.6 25%酸性高岭土悬液 | 第30-31页 |
| 1.3.7 5×柠檬酸三钠抗凝剂 | 第31页 |
| 1.3.8 LB培养基 | 第31页 |
| 1.3.9 琼脂糖凝胶电泳所用试剂 | 第31页 |
| 1.3.10 相关蛋白电泳液 | 第31-33页 |
| 1.3.11 WesternBlot相关溶液 | 第33-34页 |
| 1.4 主要试验仪器 | 第34页 |
| 1.5 重组表达质粒的构建 | 第34-35页 |
| 1.5.1 目的基因的设计与合成 | 第34-35页 |
| 1.5.2 E.coli(DE3)表达菌感受态细胞制备 | 第35页 |
| 1.5.3 重组质粒的构建 | 第35页 |
| 1.6 重组质粒的表达与鉴定 | 第35-36页 |
| 1.6.1 重组质粒的表达 | 第35-36页 |
| 1.6.2 重组蛋白的可溶性分析 | 第36页 |
| 1.6.3 重组蛋白的Western-blotting鉴定 | 第36页 |
| 1.7 重组蛋白的纯化与鉴定 | 第36页 |
| 1.7.1 Cap蛋白的纯化与鉴定 | 第36页 |
| 1.7.2 VP2蛋白的纯化与鉴定 | 第36页 |
| 1.8 重组蛋白的定量和亚单位疫苗制备 | 第36-37页 |
| 1.9 Cap、VP2相关亚单位疫苗物理性状及安全性检验 | 第37-38页 |
| 1.9.1 Cap、VP2相关亚单位疫苗物理性状检验 | 第37页 |
| 1.9.2 无菌检验 | 第37页 |
| 1.9.3 Cap、VP2相关亚单位疫苗小鼠安全性检验 | 第37-38页 |
| 1.10 Cap、VP2蛋白相关亚单位疫苗免疫效力试验 | 第38-40页 |
| 1.10.1 小鼠免疫攻毒效力试验分组及免疫 | 第38-39页 |
| 1.10.2 豚鼠免疫效力试验分组及免疫 | 第39页 |
| 1.10.3 仔猪免疫效力试验分组及免疫 | 第39-40页 |
| 1.11 免疫及攻毒效果检测 | 第40-47页 |
| 1.11.1 PCV2ELISA抗体检测 | 第40页 |
| 1.11.2 PPVHI抗体检测 | 第40-41页 |
| 1.11.3 血清中和抗体检测 | 第41页 |
| 1.11.4 小鼠淋巴细胞转化试验 | 第41-42页 |
| 1.11.5 小鼠相关细胞因子mRNA表达水平的检测 | 第42-44页 |
| 1.11.6 攻毒后小鼠脾脏病毒载量检测 | 第44-45页 |
| 1.11.7 病理切片的制备 | 第45-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-61页 |
| 2.1 重组表达质粒的构建 | 第47-48页 |
| 2.1.1 目的基因获取与表达载体酶切鉴定 | 第47页 |
| 2.1.2 重组表达质粒的鉴定 | 第47-48页 |
| 2.2 重组蛋白的表达与鉴定 | 第48-50页 |
| 2.2.1 重组蛋白的表达及可溶性分析 | 第48-49页 |
| 2.2.2 重组蛋白的Westernblotting鉴定 | 第49-50页 |
| 2.3 重组蛋白的纯化与鉴定 | 第50-51页 |
| 2.4 Cap、VP2相关亚单位疫苗物理性状及安全性检验 | 第51-52页 |
| 2.4.1 Cap、VP2相关亚单位疫苗物理性状检验 | 第51-52页 |
| 2.4.2 无菌检验 | 第52页 |
| 2.4.3 Cap、VP2相关亚单位疫苗小鼠安全性检验 | 第52页 |
| 2.5 Cap、VP2蛋白相关亚单位疫苗免疫效力试验 | 第52-61页 |
| 2.5.1 小鼠免疫攻毒效力检验 | 第52-58页 |
| 2.5.2 豚鼠免疫效力检验 | 第58-59页 |
| 2.5.3 仔猪免疫效力检验 | 第59-61页 |
| 3 讨论 | 第61-65页 |
| 3.1 重组质粒的构建及表达 | 第61-62页 |
| 3.2 疫苗制备与免疫效力验证 | 第62-65页 |
| 4 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 作者简介 | 第73页 |
