| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第16-21页 |
| 第一章 引言 | 第21-37页 |
| 1.1 兔出血症病毒 | 第21-30页 |
| 1.1.1 RHDV的分类地位 | 第21-22页 |
| 1.1.2 RHDV的形态结构与理化特性 | 第22-23页 |
| 1.1.3 RHDV的基因组结构及蛋白组成 | 第23-28页 |
| 1.1.4 RHDV的复制周期 | 第28-30页 |
| 1.2 核仁素 | 第30-36页 |
| 1.2.1 核仁素的结构 | 第30-32页 |
| 1.2.2 核仁素的生物学功能 | 第32-35页 |
| 1.2.3 核仁素在病毒感染中的作用 | 第35-36页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第36-37页 |
| 第二章 核仁素在兔出血症病毒感染中的作用及其机制研究 | 第37-70页 |
| 2.1 材料 | 第38-40页 |
| 2.1.1 细胞、病毒、菌种和载体 | 第38页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第38页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第38页 |
| 2.1.4 主要试剂及抗体 | 第38-39页 |
| 2.1.5 主要缓冲液及试剂的配制 | 第39-40页 |
| 2.2 研究方法 | 第40-49页 |
| 2.2.1 细胞总RNA提取及c DNA合成 | 第40-41页 |
| 2.2.2 质粒构建 | 第41-43页 |
| 2.2.3 质粒和si RNA细胞转染 | 第43页 |
| 2.2.4 Western blot检测（WB） | 第43-44页 |
| 2.2.5 免疫共沉淀（Co-IP） | 第44页 |
| 2.2.6 银染与质谱分析 | 第44-45页 |
| 2.2.7 GST融合蛋白的原核表达 | 第45页 |
| 2.2.8 GST-pulldown | 第45页 |
| 2.2.9 RHDV颗粒纯化与FITC标记 | 第45-46页 |
| 2.2.10 RHDV吸附与内化实验 | 第46页 |
| 2.2.11 激光共聚焦 | 第46-47页 |
| 2.2.12 荧光配体摄取与测定 | 第47页 |
| 2.2.13 抑制剂对RHDV内化的影响 | 第47页 |
| 2.2.14 定量RT-PCR | 第47-48页 |
| 2.2.15 动物免疫保护实验 | 第48-49页 |
| 2.2.16 数据分析 | 第49页 |
| 2.3 研究结果 | 第49-67页 |
| 2.3.1 鉴定与VP60结合的宿主蛋白 | 第49页 |
| 2.3.2 NCL参与RHDV的内化过程 | 第49-53页 |
| 2.3.3 VP60与NCL的N末端区域相互作用 | 第53-55页 |
| 2.3.4 NCL与VP60的保守氨基酸序列相互作用 | 第55-58页 |
| 2.3.5 NCL与VP60的相互作用在RHDV内化中发挥关键作用 | 第58-60页 |
| 2.3.6 网格蛋白依赖的内吞作用参与RHDV的内化过程 | 第60页 |
| 2.3.7 NCL参与网格蛋白依赖的内吞作用 | 第60-62页 |
| 2.3.8 NCL与网格蛋白轻链（CLTA）的C末端相互作用 | 第62-64页 |
| 2.3.9 NCL与CLTA的结合在RHDV的内化中发挥重要作用 | 第64页 |
| 2.3.10 DVN肽为实验兔提供部分抵抗RHDV感染的免疫力 | 第64-67页 |
| 2.4 讨论 | 第67-70页 |
| 第三章 核仁素在兔出血症病毒复制中的作用及其分子机制 | 第70-102页 |
| 3.1 材料 | 第71页 |
| 3.1.1 细胞、病毒、菌种和载体 | 第71页 |
| 3.1.2 实验动物 | 第71页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第71页 |
| 3.1.4 主要试剂及抗体 | 第71页 |
| 3.1.5 主要缓冲液及试剂的配制 | 第71页 |
| 3.2 研究方法 | 第71-76页 |
| 3.2.1 细胞总RNA提取及c DNA合成 | 第71-72页 |
| 3.2.2 质粒构建 | 第72-73页 |
| 3.2.3 质粒和si RNA细胞转染 | 第73页 |
| 3.2.4 WB检测 | 第73页 |
| 3.2.5 亲和纯化RHDV复制复合体 | 第73-74页 |
| 3.2.6 哺乳动物双杂交实验 | 第74页 |
| 3.2.7 Co-IP实验 | 第74页 |
| 3.2.8 银染与质谱分析 | 第74页 |
| 3.2.9 GST融合蛋白的原核表达 | 第74页 |
| 3.2.10 GST-pulldown | 第74页 |
| 3.2.11 激光共聚焦 | 第74-75页 |
| 3.2.12 定量RT-PCR | 第75页 |
| 3.2.13 稳定过表达细胞系的构建 | 第75页 |
| 3.2.14 荧光素酶的测定 | 第75-76页 |
| 3.2.15 动物实验 | 第76页 |
| 3.2.16 数据分析 | 第76页 |
| 3.3 研究结果 | 第76-99页 |
| 3.3.1 HA和His插入RHDV复制子中的位点选择 | 第76-77页 |
| 3.3.2 含标签的RHDV复制子活性检测 | 第77-79页 |
| 3.3.3 鉴定RHDV复制酶相关的宿主蛋白 | 第79-83页 |
| 3.3.4 NCL参与RHDV的复制 | 第83-85页 |
| 3.3.5 NCL与RHDV Rd Rp相互作用 | 第85-87页 |
| 3.3.6 NCL与RHDV p16相互作用 | 第87-89页 |
| 3.3.7 NCL与RHDV p23相互作用 | 第89-92页 |
| 3.3.8 NCL与RHDV非结构蛋白的结合是保守的 | 第92-94页 |
| 3.3.9 NCL是RHDV复制所必需的宿主蛋白 | 第94-97页 |
| 3.3.10 NCL在RHDV复制复合体形成过程发挥桥梁作用 | 第97-99页 |
| 3.4 讨论 | 第99-102页 |
| 第四章 宿主负调控核仁素在兔出血症病毒复制中的功能研究 | 第102-120页 |
| 4.1 材料 | 第103-104页 |
| 4.1.1 细胞、病毒、菌种和载体 | 第103页 |
| 4.1.2 实验动物 | 第103页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第103页 |
| 4.1.4 主要试剂及抗体 | 第103-104页 |
| 4.1.5 主要缓冲液及试剂的配制 | 第104页 |
| 4.2 研究方法 | 第104-106页 |
| 4.2.1 总RNA提取及c DNA合成 | 第104页 |
| 4.2.2 质粒构建 | 第104页 |
| 4.2.3 质粒和si RNA细胞转染 | 第104页 |
| 4.2.4 WB检测 | 第104页 |
| 4.2.5 Co-IP实验 | 第104页 |
| 4.2.6 激光共聚焦 | 第104-105页 |
| 4.2.7 定量RT-PCR | 第105页 |
| 4.2.8 HDAC2酶活性测定 | 第105页 |
| 4.2.9 RHDV感染后的蛋白质组学和转录组学分析 | 第105页 |
| 4.2.10 数据分析 | 第105-106页 |
| 4.3 研究结果 | 第106-118页 |
| 4.3.1 RHDV感染后NCL转录水平升高而蛋白水平无差异 | 第106-108页 |
| 4.3.2 RHDV感染后激活宿主的泛素化途径 | 第108页 |
| 4.3.3 RHDV感染后NCL乙酰化水平降低而泛素化水平升高 | 第108-110页 |
| 4.3.4 NCL被HDAC2去乙酰化后与MDM2结合进入泛素化降解途径 | 第110-112页 |
| 4.3.5 HDAC2抑制RHDV的复制 | 第112页 |
| 4.3.6 RHDV激活JNK和STAT1通路上调HDAC2的表达 | 第112-115页 |
| 4.3.7 抑制JNK和STAT1通路促进RHDV复制 | 第115页 |
| 4.3.8 RHDV p16拮抗HDAC2的抗病毒作用 | 第115-118页 |
| 4.4 讨论 | 第118-120页 |
| 第五章 全文结论 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-140页 |
| 附录 | 第140-149页 |
| 致谢 | 第149-150页 |
| 作者简历 | 第150页 |
