| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-29页 |
| 1.1 骨骼肌发育概述 | 第13-22页 |
| 1.1.1 胚胎骨骼肌发育 | 第13-15页 |
| 1.1.2 斑马鱼胚胎骨骼肌发育 | 第15-17页 |
| 1.1.3 骨骼肌发育关键调控基因 | 第17-20页 |
| 1.1.4 骨骼肌发育相关信号通路 | 第20-22页 |
| 1.2 Dlks与骨骼肌发育 | 第22-27页 |
| 1.2.1 Dlk1 | 第22-24页 |
| 1.2.2 Dlk2 | 第24-27页 |
| 1.3 本实验室前期工作 | 第27页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 2 实验材料与仪器设备 | 第29-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第29页 |
| 2.2 试剂 | 第29-31页 |
| 2.3 仪器设备 | 第31-33页 |
| 3 实验方法 | 第33-54页 |
| 3.1 分子生物学实验 | 第33-41页 |
| 3.1.1 RNA的提取 | 第33页 |
| 3.1.2 反转录合成cDNA第一链 | 第33-34页 |
| 3.1.3 实时荧光定量PCR | 第34-35页 |
| 3.1.4 小鼠细胞Dlk2敲除慢病毒载体构建 | 第35-36页 |
| 3.1.5 改良醋酸铵法大量提取质粒 | 第36-38页 |
| 3.1.6 Western blotting免疫印迹 | 第38-40页 |
| 3.1.7 快速粗提基因组 | 第40页 |
| 3.1.8 原位杂交探针的制备 | 第40-41页 |
| 3.2 细胞实验 | 第41-43页 |
| 3.2.1 C2C12细胞的培养和诱导成肌分化 | 第41页 |
| 3.2.2 慢病毒包装 | 第41-42页 |
| 3.2.3 慢病毒感染 | 第42-43页 |
| 3.2.4 细胞免疫荧光 | 第43页 |
| 3.3 斑马鱼实验 | 第43-54页 |
| 3.3.1 斑马鱼饲养 | 第43-44页 |
| 3.3.2 利用CRISPR/Cas9系统构建zDlk2敲除斑马鱼 | 第44-49页 |
| 3.3.3 Dlk2敲除斑马鱼的测序检测 | 第49页 |
| 3.3.4 斑马鱼全胚鬼笔环肽免疫荧光 | 第49-50页 |
| 3.3.5 斑马鱼全胚原位杂交 | 第50-54页 |
| 4 结果与分析 | 第54-72页 |
| 4.1 敲除Dlk2抑制成肌细胞的分化 | 第54-58页 |
| 4.1.1 Dlk2敲除载体的构建和Dlk2敲除C2C12细胞系的建立 | 第54-55页 |
| 4.1.2 敲除Dlk2显著影响C2C12细胞的分化 | 第55-58页 |
| 4.2 Dlk2在斑马鱼发育过程中的功能研究 | 第58-72页 |
| 4.2.1 Dlk2在斑马鱼胚胎发育过程中的表达 | 第58-59页 |
| 4.2.2 CRISPR-Cas9敲除Dlk2斑马鱼系的建立及基因型鉴定 | 第59-62页 |
| 4.2.3 敲除Dlk2不影响斑马鱼存活率 | 第62页 |
| 4.2.4 敲除Dlk2降低斑马鱼幼鱼的游动能力 | 第62-64页 |
| 4.2.5 敲除Dlk2对斑马鱼幼鱼肌丝形态没有显著影响 | 第64-65页 |
| 4.2.6 敲除Dlk2对斑马鱼成肌相关因子表达的影响 | 第65-70页 |
| 4.2.7 斑马鱼中关于Dlk2信号通路的初步探讨 | 第70-72页 |
| 5 讨论 | 第72-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
