| 摘要 | 第3-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 缩略词说明 | 第11-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-35页 |
| 1.1 三萜是一类具有重要生物活性的天然产物 | 第15-16页 |
| 1.2 生物合成技术在三萜化合物的合成及改造中发挥重要的作用 | 第16-18页 |
| 1.2.1 宿主细胞遗传改造实现灵芝酸的大量合成 | 第16-17页 |
| 1.2.2 异源合成实现人参皂苷及稀有三萜的合成 | 第17-18页 |
| 1.3 梭链孢烷抗生素是一类结构特殊,具有重要活性的真菌三萜 | 第18-25页 |
| 1.3.1 烟曲霉酸 | 第21-22页 |
| 1.3.2 夫西地酸 | 第22-24页 |
| 1.3.3 头孢菌素P_1 | 第24-25页 |
| 1.4 梭链孢烷抗生素具有独特的抑菌机制 | 第25-27页 |
| 1.5 梭链孢烷抗生素的化学修饰未能提高化合物的抗菌活性 | 第27-30页 |
| 1.5.1 骨架的修饰 | 第27-28页 |
| 1.5.2 A环的修饰 | 第28页 |
| 1.5.3 B环的修饰 | 第28页 |
| 1.5.4 C环的修饰 | 第28-29页 |
| 1.5.5 D环的修饰 | 第29页 |
| 1.5.6 侧链的修饰 | 第29-30页 |
| 1.6 梭链孢烷抗生素的生物合成途径仍不清楚 | 第30-33页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第33-35页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第35-51页 |
| 2.1 实验菌株与质粒 | 第35页 |
| 2.2 实验培养基 | 第35-36页 |
| 2.3 实验溶液 | 第36-39页 |
| 2.4 实验试剂 | 第39-40页 |
| 2.5 实验仪器 | 第40-41页 |
| 2.6 重组质粒的构建 | 第41页 |
| 2.7 E.coli感受态细胞的制备与转化 | 第41页 |
| 2.8 A.oryzaeNSAR1转染方法 | 第41-43页 |
| 2.9 A.oryzaeNSAR1转染株孢子保存 | 第43页 |
| 2.10 菌株的发酵与产物的提取分析 | 第43-44页 |
| 2.11 E.coliBL21(DE3)表达蛋白及分离纯化 | 第44-45页 |
| 2.12 微粒体提取 | 第45页 |
| 2.13 抗金黄色葡萄球菌活性测试 | 第45页 |
| 2.14 化合物的分离纯化 | 第45-51页 |
| 第三章 烟曲霉酸生物合成基因簇的确证 | 第51-55页 |
| 3.1 前言 | 第51-52页 |
| 3.2 实验结果 | 第52-53页 |
| 3.3 小结 | 第53-55页 |
| 第四章 烟曲霉酸基因簇中剩余六个未知基因的功能研究 | 第55-71页 |
| 4.1 前言 | 第55页 |
| 4.2 实验结果 | 第55-63页 |
| 4.2.1 HelC与HelB1协同作用脱去原萜烯醇骨架的C-4β甲基 | 第55-57页 |
| 4.2.2 HelB2与HelD2对C-16进行修饰 | 第57-60页 |
| 4.2.3 HelB4氧化C-20甲基形成羧基 | 第60-61页 |
| 4.2.4 HelB3,HelD1与HelE完成烟曲霉酸的后期合成 | 第61-63页 |
| 4.3 讨论 | 第63-69页 |
| 4.3.1 HelB4催化多底物的C-20位的甲基氧化 | 第63-65页 |
| 4.3.2 C-16β羟基的乙酰化易引发脱乙酸反应 | 第65-68页 |
| 4.3.3 梭链孢烷抗生素的生物合成经历相同六步酶催化反应 | 第68-69页 |
| 4.4 小结 | 第69-71页 |
| 第五章 短链脱氢还原酶HelC的体外研究 | 第71-91页 |
| 5.1 前言 | 第71页 |
| 5.2 实验结果 | 第71-87页 |
| 5.2.1 HelC在E.coliBL21(DE3)中的异源表达及分离纯化 | 第71-72页 |
| 5.2.2 HelC体外催化多底物的氧化反应 | 第72-77页 |
| 5.2.3 HelC体外催化多底物的还原反应 | 第77-79页 |
| 5.2.4 HelB1,HelB2与HelB4无法作用于含有C-3羰基的底物 | 第79-87页 |
| 5.3 讨论 | 第87-89页 |
| 5.3.1 HelC是首次发现的催化C-3β羟基与C-3羰基互变的短链脱氢还原酶 | 第87-88页 |
| 5.3.2 烟曲霉酸合成中的脱C-4β甲基不同于甾体合成中的脱C-4α甲基 | 第88-89页 |
| 5.4 小结 | 第89-91页 |
| 第六章 化合物抗Staphylococcus aureus209P活性评价 | 第91-95页 |
| 6.1 前言 | 第91页 |
| 6.2 实验结果 | 第91-93页 |
| 6.3 讨论 | 第93页 |
| 6.4 小结 | 第93-95页 |
| 第七章 化合物的结构鉴定 | 第95-161页 |
| 7.1 前言 | 第95页 |
| 7.2 化合物的结构解析 | 第95-161页 |
| 第八章 结论与展望 | 第161-163页 |
| 8.1 结论 | 第161-162页 |
| 8.2 展望 | 第162-163页 |
| 参考文献 | 第163-171页 |
| 附录一 实验用引物 | 第171-173页 |
| 附录二 实验用质粒 | 第173-177页 |
| 附录三 实验用转染株 | 第177-179页 |
| 附图 | 第179-267页 |
| 致谢 | 第267页 |
