| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词及中英文对照 | 第7-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-35页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-32页 |
| 1.1.1 载体构建研究综述 | 第13-20页 |
| 1.1.1.1 基于酶切连接的载体构建策略 | 第13-15页 |
| 1.1.1.2 依赖于长粘性末端连接的载体构建策略 | 第15-16页 |
| 1.1.1.3 依赖于同源重组的载体构建策略 | 第16-18页 |
| 1.1.1.4 基于PCR的载体构建策略 | 第18-20页 |
| 1.1.2 微生物与植物天然免疫互作概述 | 第20-28页 |
| 1.1.2.1 病原微生物与植物互作关系 | 第20-21页 |
| 1.1.2.2 植物天然免疫系统研究进展 | 第21-25页 |
| 1.1.2.3 病原菌效应子操控植物免疫系统概述 | 第25-28页 |
| 1.1.3 线粒体在免疫系统中的角色 | 第28-32页 |
| 1.2 本研究目的及意义 | 第32页 |
| 1.3 研究技术路线 | 第32-35页 |
| 第二章 载体构建新方法 ?-PCR体系的建立 | 第35-57页 |
| 2.1 引言 | 第35-36页 |
| 2.2 材料与方法 | 第36-43页 |
| 2.2.1 载体与菌株 | 第36-37页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第37页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第37-38页 |
| 2.2.4 主要试剂配方 | 第38-39页 |
| 2.2.4.1 常用试剂配方 | 第38页 |
| 2.2.4.2 原生质体转染相关试剂配方 | 第38-39页 |
| 2.2.5 试验方法 | 第39-43页 |
| 2.2.5.1 大肠杆菌培养 | 第39页 |
| 2.2.5.2 质粒载体抽提 | 第39页 |
| 2.2.5.3 乙醇沉淀法纯化载体 | 第39-40页 |
| 2.2.5.4 质粒载体酶切 | 第40页 |
| 2.2.5.5 ?-PCR构建载体方法 | 第40-42页 |
| 2.2.5.6 大肠杆菌感受态制备、转化与菌落PCR检测 | 第42-43页 |
| 2.2.5.7 水稻黄化苗原生质体的制备 | 第43页 |
| 2.2.5.8 PEG-CaCl2法瞬时转染水稻原生质体方法 | 第43页 |
| 2.3 结果与分析 | 第43-55页 |
| 2.3.1 ?-PCR替换模式的原理与应用 | 第44-46页 |
| 2.3.2 ?-PCR删除模式的原理与应用 | 第46-48页 |
| 2.3.3 ?-PCR插入模式的原理与应用 | 第48-50页 |
| 2.3.4 单管 ?-PCR构建载体策略 | 第50-51页 |
| 2.3.5 ?-PCR构建载体的能力和效率 | 第51-53页 |
| 2.3.6 ?-PCR构建载体的测序验证和功能分析 | 第53-55页 |
| 2.4 结论 | 第55-57页 |
| 第三章 效应子AVR-Pita抑制水稻基础免疫抗性的分子机制研究 | 第57-96页 |
| 3.1 引言 | 第57-58页 |
| 3.2 材料与方法 | 第58-77页 |
| 3.2.1 供试的水稻材料 | 第58页 |
| 3.2.2 载体与菌株 | 第58-60页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第60页 |
| 3.2.4 主要试剂 | 第60-61页 |
| 3.2.5 主要试剂配方 | 第61-63页 |
| 3.2.5.1 水稻愈伤培养和遗传转化相关的主要试剂配方 | 第61-62页 |
| 3.2.5.2 酵母培养与转化相关的主要试剂配方 | 第62-63页 |
| 3.2.5.3 稻瘟菌培养与产孢相关的主要试剂配方 | 第63页 |
| 3.2.6 试验方法 | 第63-77页 |
| 3.2.6.1 基因工程常规实验方法 | 第63页 |
| 3.2.6.2 酶切连接载体构建方法 | 第63页 |
| 3.2.6.3 植物双元载体的构建 | 第63-67页 |
| 3.2.6.4 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第67-69页 |
| 3.2.6.5 植株基因组DNA微量抽提 | 第69页 |
| 3.2.6.6 植物RNA提取 | 第69页 |
| 3.2.6.7 反转录cDNA与qRT-PCR | 第69-70页 |
| 3.2.6.8 稻瘟菌孢子菌片制备 | 第70页 |
| 3.2.6.9 稻瘟菌孢子喷雾接种水稻幼苗期叶片检测 | 第70页 |
| 3.2.6.10 稻瘟菌孢子菌片接种拔节孕穗期的水稻叶片检测 | 第70-72页 |
| 3.2.6.11 叶盘法检测病原相关基因表达 | 第72页 |
| 3.2.6.12 亚细胞定位载体的构建和亚细胞定位 | 第72-73页 |
| 3.2.6.13 酵母双杂交文库制备 | 第73-74页 |
| 3.2.6.14 酵母双杂交文库筛选 | 第74-77页 |
| 3.2.6.15 水稻叶片COX全酶活性测定 | 第77页 |
| 3.3 结果与分析 | 第77-94页 |
| 3.3.1 稻瘟菌效应子AVR-Pita抑制水稻基础免疫反应 | 第77-81页 |
| 3.3.1.1 AVR-Pita-OX遗传材料的创建 | 第77-79页 |
| 3.3.1.2 AVR-Pita的表达抑制水稻天然免疫抗性 | 第79-80页 |
| 3.3.1.3 AVR-Pita抑制水稻几丁质诱发的病程相关基因的表达 | 第80-81页 |
| 3.3.1.4 AVR-Pita在水稻细胞中定位于线粒体 | 第81页 |
| 3.3.2 酵母双杂交筛选AVR-Pita在水稻细胞内的互作因子 | 第81-88页 |
| 3.3.2.1 水稻叶片cDNA酵母文库的制备 | 第81-83页 |
| 3.3.2.2 酵母双杂交筛选AVR-Pita的水稻互作因子 | 第83-84页 |
| 3.3.2.3 COX11氨基酸序列与结构分析 | 第84-86页 |
| 3.3.2.4 AVR-Pita与COX11互作关系 | 第86-87页 |
| 3.3.2.5 AVR-Pita在水稻中与OsCOX11共定位于线粒体 | 第87-88页 |
| 3.3.3 水稻OsCOX11负调控基础免疫反应 | 第88-94页 |
| 3.3.3.1 水稻OsCOX11受病原菌诱导表达 | 第88-89页 |
| 3.3.3.2 OsCOX11-KO和OsCOX11-Ri水稻遗传材料的创建 | 第89-92页 |
| 3.3.3.3 OsCOX11是抗稻瘟病信号传导途径的负调控因子 | 第92-93页 |
| 3.3.3.4 AVR-Pita的表达增强COX全酶的活性 | 第93-94页 |
| 3.4 结论 | 第94-96页 |
| 第四章 全文讨论与结论 | 第96-102页 |
| 4.1 全文讨论 | 第96-99页 |
| 4.1.1 高效的 ?-PCR载体构建新方法加快基因功能研究进程 | 第96-97页 |
| 4.1.2 稻瘟菌效应子AVR-Pita抑制水稻基础免疫的分子机制 | 第97-99页 |
| 4.2 全文结论 | 第99-100页 |
| 4.2.1 基因工程载体构建新方法 ?-PCR的结论 | 第99-100页 |
| 4.2.2 稻瘟菌效应子AVR-Pita抑制水稻基础免疫反应分子机制的结论 | 第100页 |
| 4.3 本研究的创新之处 | 第100-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-116页 |
| 附录 | 第116-119页 |
| I AVR-Pita~(176-675 bp) cDNA序列 | 第116-117页 |
| II OsCOX11基因组序列 | 第117-119页 |
| III 攻读博士学位期间发表的论文 | 第119页 |
