| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 本文主要缩写词表 | 第10-11页 |
| 1 综述 | 第11-21页 |
| 1.1 癌症干细胞(CSC)与Nanog基因简介 | 第11-17页 |
| 1.1.1 癌症干细胞(CSC)简介 | 第11-13页 |
| 1.1.1.1 癌症干细胞概念 | 第11-12页 |
| 1.1.1.2 癌症干细胞特征 | 第12-13页 |
| 1.1.1.3 癌症干细胞的起源 | 第13页 |
| 1.1.2 Nanog基因简介 | 第13-16页 |
| 1.1.2.1 Nanog基因的发现与结构特征 | 第13-14页 |
| 1.1.2.2 Nanog基因的生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.1.2.3 Nanog基因与癌细胞的关系 | 第15-16页 |
| 1.1.3 Nanog基因与癌症干细胞(CSCs)的关系 | 第16-17页 |
| 1.2 诱导多能干细胞(iPSCs)的与癌症干细胞(CSCs)的联系 | 第17-20页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 实验材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-25页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 本研究采用的7种细胞 | 第21页 |
| 2.1.3 所用的酶,试剂、耗材 | 第21页 |
| 2.1.4 培养基及抗生素配置(具体配方见附录Ⅰ) | 第21-23页 |
| 2.1.4.1 细菌培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.4.2 一般细胞培养基: | 第22页 |
| 2.1.4.3 诱导用细胞培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.5 PCR引物及荧光定量PCR引物 | 第23-24页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 pTRE-mCherry-Nanog重组质粒的构建 | 第25-27页 |
| 2.2.2 NIH/3T3细胞及4种癌症细胞的培养、保存、复苏 | 第27-31页 |
| 2.2.2.1 NIH/3T3细胞及4种癌症细胞的培养 | 第27-29页 |
| 2.2.2.2 NIH/3T3及4种癌症细胞的保存 | 第29-30页 |
| 2.2.2.3 NIH/3T3及4种癌症细胞的复苏 | 第30-31页 |
| 2.2.3 pTRE-mCherry-Nanog重组质粒转化NIH/3T3细胞 | 第31-32页 |
| 2.2.4 干细胞关键基因的表达分析 | 第32-34页 |
| 2.2.4.1 细胞总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.4.2 反转录PCR | 第33页 |
| 2.2.4.3 荧光定量PCR | 第33-34页 |
| 2.2.5 癌症细胞上清液的诱导培养 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-60页 |
| 3.1 pTRE-mCherry-Nanog重组质粒构建结果与分析 | 第35-39页 |
| 3.1.1 Nanog重组质粒构建图 | 第35-36页 |
| 3.1.2 PCR扩增结果与分析 | 第36页 |
| 3.1.3 目的基因与pTRE-mCherry质粒双酶切结果与分析 | 第36-37页 |
| 3.1.4 菌液PCR验证结果与分析 | 第37页 |
| 3.1.5 重组质粒酶切验证结果与分析 | 第37-38页 |
| 3.1.6 测序结果与分析 | 第38-39页 |
| 3.2 NIH/3T3及4种癌症细胞的培养结果与分析 | 第39-40页 |
| 3.3 重组细胞培养结果与分析 | 第40-52页 |
| 3.3.1 质粒转化NIH/3T3量的确定 | 第40-45页 |
| 3.3.2 强力霉素Doxycycline最佳诱导浓度的确定 | 第45-50页 |
| 3.3.3 400 ng/ml强力霉素浓度下,转化时最佳细胞密度的确定 | 第50-52页 |
| 3.4 干细胞关键基因的表达分析结果与分析 | 第52-56页 |
| 3.5 癌细胞上清液的诱导培养 | 第56-58页 |
| 3.6 癌细胞上清液的诱导培养后Nanog与Caspase基因表达 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 4.1 Nanog重组质粒的构建 | 第60页 |
| 4.2 Nanog重组质粒转化NIH/3T3细胞及诱导其表达的优化 | 第60-61页 |
| 4.3 干细胞相关基因的表达分析 | 第61-62页 |
| 4.4 癌症细胞上清液的体外诱导与分析 | 第62-63页 |
| 5 总结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 附录Ⅰ 本研究所采用的培养基配方 | 第73-76页 |
| 附录Ⅱ pTRE-mCherry-Nanog重组质粒序列 | 第76-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
