| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 英文缩写词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 三肽囊素研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1.1 法氏囊研究简况 | 第13-14页 |
| 1.1.2 法氏囊组织提取物的生物学活性研究 | 第14-15页 |
| 1.1.3 三肽囊素的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2 噬菌体展示技术 | 第17-19页 |
| 1.2.1 噬菌体展示技术的原理及展示系统的分类 | 第17-18页 |
| 1.2.2 噬菌体展示技术在筛选模拟抗原表位中的应用 | 第18-19页 |
| 1.3 猪痘病毒及其作为表达载体的研究进展 | 第19-23页 |
| 1.3.1 猪痘病毒的简介 | 第19-20页 |
| 1.3.2 猪痘病毒的分子生物学特性 | 第20页 |
| 1.3.3 猪痘病毒作为表达载体的研究进展 | 第20-23页 |
| 第二章 含Bursin模拟表位的噬菌体筛选及其模拟肽的鉴定 | 第23-37页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-29页 |
| 2.2.1 淘选模拟三肽囊素抗原表位的噬菌体 | 第24-25页 |
| 2.2.2 噬菌体的滴度测定 | 第25-26页 |
| 2.2.3 噬菌体的扩增与纯化 | 第26页 |
| 2.2.4 噬菌体克隆DNA模板的快速纯化及序列测定 | 第26-27页 |
| 2.2.5 阳性噬菌体克隆的鉴定 | 第27页 |
| 2.2.6 合成肽 | 第27-28页 |
| 2.2.7 合成肽竞争ELISA的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3 结果 | 第29-35页 |
| 2.3.1 亲和淘选结果 | 第29-30页 |
| 2.3.2 噬菌体扩增与纯化结果 | 第30-31页 |
| 2.3.3 噬菌体DNA提取及测序结果 | 第31-33页 |
| 2.3.4 阳性噬菌体克隆鉴定结果 | 第33页 |
| 2.3.5 合成肽的结果 | 第33-34页 |
| 2.3.6 合成肽竞争ELISA鉴定结果 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第35-37页 |
| 2.4.1 亲和淘选模拟三肽囊素表位的噬菌体 | 第35页 |
| 2.4.2 间接竞争ELISA法筛选三肽囊素的模拟肽 | 第35-36页 |
| 2.4.3 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 M42模拟肽的核心序列及其与脾淋巴细胞结合的分析 | 第37-43页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第37页 |
| 3.1.1 主要仪器设备 | 第37页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 3.1.3 实验材料 | 第37页 |
| 3.2 方法 | 第37-39页 |
| 3.2.1 合成不同肽用作核心序列的分析 | 第37-38页 |
| 3.2.2 竞争ELISA法分析M42肽核心序列 | 第38页 |
| 3.2.3 淋巴细胞悬液的制备 | 第38-39页 |
| 3.2.4 荧光标记肽与淋巴细胞作用及结果观察 | 第39页 |
| 3.3 结果 | 第39-41页 |
| 3.3.1 竞争ELISA法分析M42肽核心序列结果 | 第39-40页 |
| 3.3.2 荧光标记肽与淋巴细胞作用结果 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第41-43页 |
| 3.4.1 M42肽核心序列分析 | 第41-42页 |
| 3.4.2 M42肽与脾淋巴细胞结合特性分析 | 第42页 |
| 3.4.3 小结 | 第42-43页 |
| 第四章 Bursin模拟肽对杂交瘤细胞抗体分泌的影响 | 第43-51页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第43-44页 |
| 4.1.1 主要仪器设备 | 第43页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 4.1.3 杂交瘤细胞株 | 第43页 |
| 4.1.4 试剂的配制 | 第43-44页 |
| 4.2 方法 | 第44-46页 |
| 4.2.1 小鼠腹水中单克隆抗体的纯化 | 第44页 |
| 4.2.2 标准曲线的制作 | 第44-45页 |
| 4.2.3 杂交瘤细胞复苏及培养 | 第45页 |
| 4.2.4 杂交瘤细胞培养浓度摸索 | 第45页 |
| 4.2.5 Bursin及模拟肽对杂交瘤细胞抗体分泌的影响 | 第45页 |
| 4.2.6 间接ELISA检测杂交瘤抗体分泌情况 | 第45-46页 |
| 4.3 结果 | 第46-49页 |
| 4.3.1 纯化单克隆抗体结果 | 第46-47页 |
| 4.3.2 标准曲线的制作及细胞培养浓度摸索结果 | 第47页 |
| 4.3.3 Bursin及模拟肽对杂交瘤细胞抗体分泌影响结果 | 第47-49页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第49-51页 |
| 4.4.1 单克隆抗体的纯化 | 第49页 |
| 4.4.2 Bursin及模拟肽对杂交瘤抗体分泌的影响 | 第49-50页 |
| 4.4.3 小结 | 第50-51页 |
| 第五章 Bursin模拟肽在小鼠体内的免疫增强作用 | 第51-58页 |
| 5.1 实验材料与试剂 | 第51页 |
| 5.1.1 主要仪器设备 | 第51页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第51页 |
| 5.1.3 细胞和病毒 | 第51页 |
| 5.1.4 实验动物及材料 | 第51页 |
| 5.2 方法 | 第51-53页 |
| 5.2.1 重组猪痘病毒的增殖及滴度测定 | 第51-52页 |
| 5.2.2 重组猪痘病毒的灭活及灭活效果检查 | 第52页 |
| 5.2.3 实验小鼠的免疫 | 第52-53页 |
| 5.2.4 免疫小鼠血清采集及PCV2抗体的检测 | 第53页 |
| 5.3 结果 | 第53-56页 |
| 5.3.1 重组猪痘病毒增殖及滴度测定结果 | 第53-54页 |
| 5.3.2 病毒灭活检查 | 第54-55页 |
| 5.3.3 免疫小鼠抗体水平检测结果 | 第55-56页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第56-58页 |
| 5.4.1 讨论 | 第56页 |
| 5.4.2 小结 | 第56-58页 |
| 第六章 表达M42模拟肽的重组猪痘病毒转移载体构建 | 第58-65页 |
| 6.1 实验材料与试剂 | 第58-59页 |
| 6.1.1 主要仪器设备 | 第58页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第58页 |
| 6.1.3 质粒和菌株 | 第58页 |
| 6.1.4 试剂的配制 | 第58-59页 |
| 6.1.5 P28启动子序列 | 第59页 |
| 6.2 方法 | 第59-61页 |
| 6.2.1 M42肽DNA模板的合成 | 第59页 |
| 6.2.2 PCR扩增P28-M42片段 | 第59-60页 |
| 6.2.3 pSW-E11-28C质粒提取 | 第60-61页 |
| 6.2.4 转移载体的构建 | 第61页 |
| 6.3 结果 | 第61-63页 |
| 6.3.1 扩增P28-M42片段及提取pSW-E11-28C质粒结果 | 第61-62页 |
| 6.3.2 构建质粒转化JM109的菌落PCR鉴定 | 第62-63页 |
| 6.3.3 pSW-E11-28C-28M42双酶切鉴定 | 第63页 |
| 6.4 讨论与小结 | 第63-65页 |
| 6.4.1 讨论 | 第63-64页 |
| 6.4.2 小结 | 第64-65页 |
| 全文总结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
