| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1.引言 | 第11-25页 |
| 1.1 .选择性剪切与肿瘤 | 第11-14页 |
| 1.1.1 .选择性剪切的类型 | 第11-12页 |
| 1.1.2 .选择性剪切调控过程 | 第12页 |
| 1.1.3 .选择性剪切与肿瘤的关系及生理意义 | 第12-14页 |
| 1.1.3.1 选择性剪切与肿瘤 | 第12-14页 |
| 1.1.3.2 选择性剪切对编码蛋白的影响 | 第14页 |
| 1.2 .丙酮酸激酶与肿瘤 | 第14-18页 |
| 1.2.1 .肿瘤代谢中的Warburg效应 | 第14-15页 |
| 1.2.2 .丙酮酸激酶(Pyruvate Kinase,PKM) | 第15-16页 |
| 1.2.3 .PKM2在肿瘤代谢和发展中的作用 | 第16-18页 |
| 1.3 .丙酮酸激酶(Pyruvate Kinase,PKM)的选择性剪切 | 第18-19页 |
| 1.3.1 .丙酮酸激酶选择性剪切的方式 | 第18-19页 |
| 1.3.2 .运用生物信息学的方法确立调控丙酮酸激酶选择性剪切的因子 | 第19页 |
| 1.4 .信号转导和转录激活因子3(STAT3) | 第19-22页 |
| 1.4.1 .STAT3的结构及功能 | 第20页 |
| 1.4.2 .STAT3与肿瘤 | 第20-22页 |
| 1.4.3 .STAT3可以结合到长链非编码RNA上调控人类树突状细胞的分化 | 第22页 |
| 1.5 .MZF1(Mye loid zinc finger protein1) | 第22-24页 |
| 1.5.1 .MZF1的结构与功能 | 第22-23页 |
| 1.5.2 .MZF1与肿瘤的关系 | 第23-24页 |
| 1.6 .本项目研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 2.材料与方法 | 第25-35页 |
| 2.1 .实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 .抗体 | 第25页 |
| 2.1.2 .主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 .主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.4 .细胞株 | 第26页 |
| 2.2 .实验方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1 .细胞生物学方法 | 第26-27页 |
| 2.2.1.1 .细胞培养 | 第26-27页 |
| 2.2.1.2 .瞬时转染 | 第27页 |
| 2.2.1.3 .MTT增殖实验 | 第27页 |
| 2.2.2. 分子生物学实验 | 第27-33页 |
| 2.2.2.1 .分子克隆与质粒制备 | 第27-29页 |
| 2.2.2.2 .免疫印迹 | 第29-30页 |
| 2.2.2.3 .RT-PCR | 第30-32页 |
| 2.2.2.4 .酶切cDNA | 第32页 |
| 2.2.2.5 .RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation) | 第32-33页 |
| 2.2.2.6 .EMSA实验 | 第33页 |
| 2.2.3 .单链RNA的合成 | 第33-35页 |
| 3.实验结果与分析 | 第35-58页 |
| 3.1 .PKM基因选择性剪切机制的确立 | 第35-44页 |
| 3.1.1 .PKM1、PKM2在小鼠组织、人正常细胞和肿瘤细胞中表达的差异性分析 | 第35-38页 |
| 3.1.2 .生物信息学方法推测STAT3/MZF1可能为转录调控因子的理论依据 | 第38-40页 |
| 3.1.3 .STAT3/MZF1与PKM1/PKM2表达的相关性 | 第40-41页 |
| 3.1.4 .STAT3参与PKM向PKM2亚型的转换 | 第41-42页 |
| 3.1.5 .MZF1参与PKM向PKM1亚型的转换 | 第42-44页 |
| 3.2 .STAT3/MZF1发挥调控PKM基因选择性剪切作用的具体机制 | 第44-54页 |
| 3.2.1 .EMSA实验检测STAT3/MZF1是否能与PKM前体mRNA的结合 | 第44-46页 |
| 3.2.2 .RIP实验证明STAT3/MZF1通过结合到PKM前体mRNA上发挥作用 | 第46-50页 |
| 3.2.3 .IP实验证明STAT3/MZF1能够招募剪切复合体蛋白和SR蛋白 | 第50-51页 |
| 3.2.4 .RIP实验证明SR相关蛋白-U2AF35能够结合于PKM前体mRNA上 | 第51-54页 |
| 3.3 .STAT3/MZF1调控PKM基因选择性剪切的功能研究 | 第54-58页 |
| 3.3.1 .STAT3/MZF1影响肿瘤细胞的生长 | 第54页 |
| 3.3.2 .STAT3/MZF1对乳腺癌细胞代谢表型的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.3 .STAT3/MZF1对PKM1/PKM2表达的逆转效应 | 第55-56页 |
| 3.3.4 .STAT3/MZF1在调控PKM基因剪切过程中存在着拮抗效应 | 第56-58页 |
| 4.讨论 | 第58-62页 |
| 4.1 .丙酮酸激酶选择性剪切机制的发生及调控因子的初步确立 | 第58-59页 |
| 4.2 .STAT3/MZF1作为RBP调控PKM前体mRNA的选择性剪切 | 第59-60页 |
| 4.3 .STAT3/MZF1调控丙酮酸激酶的选择性剪切所具有的生理学意义 | 第60-62页 |
| 5.主要结论和创新点 | 第62-63页 |
| 5.1 .主要结论 | 第62页 |
| 5.2 .主要创新点 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
