| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1. 前言 | 第9-15页 |
| ·黄曲霉毒素 | 第9-10页 |
| ·黄曲霉毒素的理化性质及危害 | 第9页 |
| ·黄曲霉毒素的法规及检测 | 第9-10页 |
| ·抗体简介 | 第10-11页 |
| ·抗体的发展 | 第10页 |
| ·单链抗体简介 | 第10-11页 |
| ·单链抗体的构建 | 第11页 |
| ·绿色荧光蛋白简介 | 第11-13页 |
| ·绿色荧光蛋白简介 | 第11-12页 |
| ·绿色荧光蛋白的优点 | 第12-13页 |
| ·绿色荧光蛋白的应用 | 第13页 |
| ·荧光标记重组抗体 | 第13-14页 |
| ·立题意义和研究内容 | 第14-15页 |
| ·本课题研究意义 | 第14页 |
| ·本课题主要研究内容 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-21页 |
| ·实验材料 | 第15-18页 |
| ·菌株与质粒 | 第15页 |
| ·工具酶与试剂 | 第15-16页 |
| ·实验仪器与设备 | 第16页 |
| ·溶液的配制 | 第16-17页 |
| ·PCR引物 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-21页 |
| ·质粒DNA抽提 | 第18页 |
| ·引物合成、目的基因的聚合酶链式反应(PCR)和DNA片段测序 | 第18页 |
| ·目的片段与T载体的连接 | 第18页 |
| ·质粒DNA的酶切验证 | 第18页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳和胶回收 | 第18页 |
| ·目的片段与pET载体的连接 | 第18页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备和转化 | 第18页 |
| ·重组菌体的诱导表达 | 第18-19页 |
| ·重组蛋白质荧光活性的测定 | 第19页 |
| ·目的蛋白质的提取及纯化 | 第19页 |
| ·十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第19页 |
| ·酶联免疫吸附法(ELSA)测定重组蛋白质抗体活性 | 第19-20页 |
| ·重组蛋白荧光强度的测定 | 第20页 |
| ·重组蛋白质的定量检测 | 第20-21页 |
| 3 结果与讨论 | 第21-36页 |
| ·单链抗体(ScFv)基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆 | 第21-24页 |
| ·目的基因的扩增与回收 | 第22-23页 |
| ·目的基因亚克隆及验证 | 第23页 |
| ·重组载体pET22b-ScFv、pET22b-GFP、pET22b-VH的构建 | 第23-24页 |
| ·重组质粒pET22b/GFP-ScFv、pET22b/ScFv-GFP的构建及验证 | 第24页 |
| ·重组质粒pET32a/GFP-ScFv、pET32a/ScFv-GFP的构建及验证 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pET22b/GFP-VH、pET22b/VH-GFP的构建及验证 | 第25-26页 |
| ·重组质粒pET32a/GFP-VH、pET32a/VH-GFP的构建及验证 | 第26页 |
| ·含GFP-ScFv及ScFv-GFP基因的重组菌株发酵表达及活性分析 | 第26-29页 |
| ·GFP-ScFv及ScFv-GFP的诱导表达及纯化 | 第26页 |
| ·GFP-ScFv及ScFv-GFP的SDS-PAGE | 第26-28页 |
| ·GFP-ScFv及ScFv-GFP的荧光检测 | 第28-29页 |
| ·GFP-ScFv及ScFv-GFP的ELISA检测 | 第29页 |
| ·重组菌株GFP-VH及VH-GFP的诱导表达 | 第29-33页 |
| ·GFP-VH及VH-GFP的诱导表达及纯化 | 第29页 |
| ·GFP-VH及VH-GFP的SDS-PAGE | 第29-31页 |
| ·GFP-VH及VH-GFP的荧光检测 | 第31页 |
| ·GFP-VH及VH-GFP的抗体活性检测 | 第31-32页 |
| ·GFP-VH及VH-GFP融合蛋白的荧光强度 | 第32-33页 |
| ·活性重组蛋白质的定量检测 | 第33-34页 |
| ·不同表达载体对重组菌株表达融合蛋白的影响 | 第34页 |
| ·融合蛋白降解分析 | 第34-36页 |
| 4. 主要结论 | 第36-37页 |
| 展望 | 第37-38页 |
| 致谢 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-45页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第45-46页 |
| 附录:ScFv基因序列 | 第46页 |
