| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 缩略词对照表 | 第12-13页 |
| 第一部分 Numb磷酸化决定细胞分裂早期物理形态和细胞分裂启动紧密协同的机制研究 | 第13-59页 |
| 1 前言 | 第13-22页 |
| 1.1 细胞分裂 | 第13-17页 |
| 1.1.1 细胞有丝分裂 | 第13-14页 |
| 1.1.2 细胞有丝分裂过程中的细胞形态变化及调控机制 | 第14-17页 |
| 1.2 Numb蛋白 | 第17-22页 |
| 1.2.1 Numb蛋白家族与功能 | 第17-18页 |
| 1.2.2 Numb与细胞不对称分裂 | 第18-21页 |
| 1.2.3 Numb与细胞周期调控 | 第21-22页 |
| 1.3 研究内容及意义 | 第22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-28页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第22-23页 |
| 2.1.2 试剂与抗体 | 第23-25页 |
| 2.1.3 质粒 | 第25页 |
| 2.1.4 主要溶液配置 | 第25-27页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.2.1 细胞培养与细胞周期同步化 | 第28页 |
| 2.2.2 质粒构建 | 第28-31页 |
| 2.2.3 细胞转染 | 第31页 |
| 2.2.4 慢病毒包装及稳转细胞系构建 | 第31-32页 |
| 2.2.5 免疫印迹分析 | 第32-33页 |
| 2.2.6 细胞免疫荧光分析 | 第33-34页 |
| 2.2.7 免疫共沉淀分析 | 第34页 |
| 2.2.8 蛋白质组学分析 | 第34页 |
| 2.2.9 GST-Numb融合蛋白的表达与纯化 | 第34-35页 |
| 2.2.10 体外激酶反应 | 第35页 |
| 2.2.11 活细胞成像分析 | 第35-36页 |
| 2.2.12 亚细胞组份分离 | 第36页 |
| 2.2.13 统计学分析 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-53页 |
| 3.1 Numb磷酸化水平在分裂M期显著升高 | 第36-38页 |
| 3.2 Aurora A介导分裂M期Numb的磷酸化 | 第38-41页 |
| 3.3 Numb磷酸化缺失突变体异常聚集于M期细胞膜和细胞粘连结构.. | 第41-43页 |
| 3.4 Numb磷酸化调控分裂M期黏着斑的解聚 | 第43-45页 |
| 3.5 Numb磷酸化介导其在分裂M期从细胞膜释放入细胞质中 | 第45-47页 |
| 3.6 抑制Aurora A激酶活性获得Numb非磷酸化突变体类似的表型 | 第47-48页 |
| 3.7 Numb参与细胞分裂M期的启动 | 第48-50页 |
| 3.8 Numb磷酸化促进细胞进入分裂M期 | 第50-52页 |
| 3.9 Numb参与控制分裂早期Cdc25C的激活 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| 5 结论和展望 | 第57-59页 |
| 第二部分 靶向细胞周期激酶Plk1的新型抗肿瘤药物研发 | 第59-99页 |
| 1 前言 | 第59-69页 |
| 1.1 细胞周期激酶Plk1(Polo-like Kinase 1) | 第59-67页 |
| 1.1.1 Polo-like激酶家族 | 第59-60页 |
| 1.1.2 Plk1与细胞周期调控 | 第60-62页 |
| 1.1.3 Plk1与肿瘤 | 第62-64页 |
| 1.1.4 Plk1抑制剂研究现状 | 第64-67页 |
| 1.2 吡咯咪唑聚酰胺类化合物 | 第67-69页 |
| 1.2.1 吡咯咪唑聚酰胺的基本特性 | 第67-68页 |
| 1.2.2 吡咯咪唑聚酰胺作为基因表达抑制剂的研究 | 第68-69页 |
| 1.3 研究内容及意义 | 第69页 |
| 2 材料与方法 | 第69-76页 |
| 2.1 实验材料 | 第69-71页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第69-70页 |
| 2.1.2 试剂与抗体 | 第70-71页 |
| 2.1.3 质粒 | 第71页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第71页 |
| 2.2 实验方法 | 第71-76页 |
| 2.2.1 PIP分子的合成 | 第71页 |
| 2.2.2 反转录及实时荧光定量PCR | 第71-72页 |
| 2.2.3 稳转细胞系及定点突变质粒构建 | 第72-73页 |
| 2.2.4 荧光素酶活性检测 | 第73页 |
| 2.2.5 活细胞成像分析 | 第73-74页 |
| 2.2.6 细胞凋亡检测 | 第74页 |
| 2.2.7 细胞增殖检测 | 第74页 |
| 2.2.8 染色质免疫沉淀分析 | 第74-75页 |
| 2.2.9 裸鼠移植瘤模型构建 | 第75页 |
| 2.2.10 免疫组化分析 | 第75页 |
| 2.2.11 统计学分析 | 第75-76页 |
| 3 结果与分析 | 第76-95页 |
| 3.1 设计靶向Plk1启动子的吡咯咪唑聚酰胺类化合物 | 第76-77页 |
| 3.2 PIP3的细胞摄取及核靶向 | 第77-79页 |
| 3.3 PIP3有效抑制Plk1表达 | 第79-82页 |
| 3.4 PIP3对Plk1靶向特异性的验证 | 第82-85页 |
| 3.5 PIP3对细胞周期的影响 | 第85-89页 |
| 3.6 PIP3抑制肿瘤细胞的增殖 | 第89-91页 |
| 3.7 外源性Plk1表达减弱PIP3导致的细胞周期阻滞和增殖抑制 | 第91-92页 |
| 3.8 PIP3抑制裸鼠皮下移植瘤的生长 | 第92-95页 |
| 4 讨论 | 第95-98页 |
| 5 结论和展望 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-110页 |
| 附录 | 第110-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 作者简历 | 第115-116页 |
| 博士期间发表论文目录 | 第116-117页 |
| 博士期间参与的基金项目 | 第117页 |
