| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-23页 |
| 1.1 研究背景 | 第9-12页 |
| 1.2 蛋白质突变相关知识介绍 | 第12-20页 |
| 1.2.1 蛋白质的组成 | 第12-16页 |
| 1.2.2 影响蛋白质活性的因素 | 第16-17页 |
| 1.2.3 提高蛋白质分子活性的策略 | 第17-20页 |
| 1.3 同源模建 | 第20页 |
| 1.4 用于YASARA的FoldX插件 | 第20-21页 |
| 1.5 受控分子动力学模拟(SMD)模拟 | 第21页 |
| 1.6 本课题研究思路 | 第21-23页 |
| 第二章 IL-21突变体的建立 | 第23-35页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 确定突变位点 | 第23-26页 |
| 2.2.1 序列比对确定突变位点 | 第23-24页 |
| 2.2.2 IL-21二元复合物构象分析确定突变位点 | 第24-26页 |
| 2.2.3 辅助软件预测突变位点 | 第26页 |
| 2.3 同源模建获得IL-21突变体结构 | 第26页 |
| 2.4 Foldx分析IL-21突变前后△G的变化 | 第26-27页 |
| 2.5 进行受控分子动力学模拟(SMD) | 第27页 |
| 2.5.1 结构准备 | 第27页 |
| 2.5.2 SMD模拟实验参数设置 | 第27页 |
| 2.6 结果与讨论 | 第27-34页 |
| 2.6.1 确定的IL-21三个突变体中的突变位点 | 第27-28页 |
| 2.6.2 WThIL-21的空间结构以及同源模建获得的三个突变体的空间构象 | 第28-29页 |
| 2.6.3 Foldx分析IL-21突变前后△G的变化 | 第29页 |
| 2.6.4 对IL-2和D10的每个残基进行骨架顺从性分析 | 第29-30页 |
| 2.6.5 对IL-21及IL-21高效突变体的每个残基进行骨架顺从性分析 | 第30-32页 |
| 2.6.6 对设计的三个突变体的每个残基进行骨架顺从性分析 | 第32-34页 |
| 2.7 本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 hIL-21突变体3的高产量蛋白获得条件的优化 | 第35-52页 |
| 3.1 引言 | 第35-36页 |
| 3.2 实验流程图 | 第36页 |
| 3.3 实验材料 | 第36-41页 |
| 3.3.1 质粒和菌株 | 第36页 |
| 3.3.2 试剂和仪器 | 第36-37页 |
| 3.3.3 主要溶液配方 | 第37-41页 |
| 3.4 实验部分 | 第41-46页 |
| 3.4.1 E.coli感受态细胞Rosetta(DE3)的制备 | 第41页 |
| 3.4.2 质粒的处理和保存 | 第41页 |
| 3.4.3 质粒抽提过程 | 第41-42页 |
| 3.4.4 转化和预培养 | 第42页 |
| 3.4.5 高细胞密度法IPTG诱导hIL-21突变体3重组蛋白的表达 | 第42-43页 |
| 3.4.6 SDS-PAGE检测 | 第43-44页 |
| 3.4.7 在LB和M9中同时诱导,验证菌体和质粒质量是否完好 | 第44页 |
| 3.4.8 LB中诱导温度和IPTG浓度的优化 | 第44页 |
| 3.4.9 二次菌落选择 | 第44-45页 |
| 3.4.10 M9中氨基酸条件优化 | 第45页 |
| 3.4.11 M9培养基pH值优化 | 第45页 |
| 3.4.12 M9中诱导温度的优化 | 第45-46页 |
| 3.5 结果和讨论 | 第46-50页 |
| 3.5.1 高细胞密度法IPTG诱导hIL-21突变体3重组蛋白的表达 | 第46页 |
| 3.5.2 在LB和M9中同时诱导,验证菌体和质粒质量是否完好 | 第46-47页 |
| 3.5.3 LB中诱导温度和IPTG浓度的优化 | 第47页 |
| 3.5.4 二次菌落选择 | 第47-48页 |
| 3.5.5 M9中氨基酸条件优化 | 第48-49页 |
| 3.5.6 M9培养基pH值优化 | 第49-50页 |
| 3.5.7 M9中诱导温度的优化 | 第50页 |
| 3.6 本章小结 | 第50-51页 |
| 3.7 展望 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
