| 中文摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 英汉缩略词对照表 | 第17-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-60页 |
| 1 亲环素基因 | 第19-39页 |
| 1.1 亲环素 | 第19-20页 |
| 1.2 亲环素A | 第20-23页 |
| 1.3 亲环素A的结构特征 | 第23-26页 |
| 1.4 亲环素A的分布 | 第26-27页 |
| 1.4.1 亲环素A在物种间的分布 | 第26页 |
| 1.4.2 亲环素A在组织间的分布 | 第26-27页 |
| 1.4.3 在细胞水平上的分布 | 第27页 |
| 1.5 亲环素A的生物学功能 | 第27-35页 |
| 1.5.1 肽脯氨酰顺反异构酶活性的生物学功能 | 第27-29页 |
| 1.5.2 介导CsA的免疫抑制 | 第29-30页 |
| 1.5.3 参与细胞周期的调节 | 第30-32页 |
| 1.5.5 促进肿瘤细胞的增殖 | 第32-33页 |
| 1.5.6 参与炎症反应 | 第33页 |
| 1.5.7 参与病毒感染 | 第33-34页 |
| 1.5.8 植物亲环素的功能 | 第34-35页 |
| 1.6 CypA在细胞内的生化反应机制 | 第35-38页 |
| 1.6.1 分子伴侣 | 第35-36页 |
| 1.6.2 信号分子 | 第36页 |
| 1.6.3 分泌型CypA与其受体CD147相互作用 | 第36-37页 |
| 1.6.4 CypA与FHIT基因的相互作用 | 第37页 |
| 1.6.5 CypA与AIF的互作 | 第37页 |
| 1.6.6 CypA与PRLr的相互作用 | 第37页 |
| 1.6.7 CypA与多种耐药性基因的互作 | 第37-38页 |
| 1.7 水产动物CypA基因的研究现状 | 第38页 |
| 1.8 小结 | 第38-39页 |
| 2 水产动物新基因生物学功能的主要技术方法及其原理和技术特点 | 第39-50页 |
| 2.1 新基因cDNA全长的克隆策略 | 第40页 |
| 2.2 生物信息学分析 | 第40-44页 |
| 2.2.1 新基因编码区的特性分析 | 第40-41页 |
| 2.2.2 序列比对 | 第41-42页 |
| 2.2.3 编码产物预测分析 | 第42-44页 |
| 2.3 系统发育分析 | 第44-45页 |
| 2.4 新基因的表达谱分析 | 第45-48页 |
| 2.4.1 mRNA水平的表达谱分析 | 第45-47页 |
| 2.4.2 蛋白质水平的表达谱分析 | 第47-48页 |
| 2.5 基因功能的研究方法 | 第48-50页 |
| 2.5.1 基因转导 | 第49页 |
| 2.5.2 动物转基因技术 | 第49页 |
| 2.5.3 RNA干扰 | 第49页 |
| 2.5.4 基因敲除 | 第49-50页 |
| 2.6 基因编码蛋白质互作的研究 | 第50页 |
| 2.7 小结 | 第50页 |
| 3 克氏原螯虾相关背景研究 | 第50-58页 |
| 3.1 分类地位 | 第51页 |
| 3.2 地理分布 | 第51-52页 |
| 3.3 形态特征 | 第52页 |
| 3.4 营养价值 | 第52-53页 |
| 3.5 生态习性 | 第53-54页 |
| 3.6 生活史与繁殖习性 | 第54页 |
| 3.7 遗传多样性 | 第54-58页 |
| 3.8 功能基因研究 | 第58页 |
| 3.9 小结 | 第58页 |
| 4 本研究目的与意义 | 第58-59页 |
| 5 主要内容 | 第59页 |
| 6 技术路线 | 第59-60页 |
| 第二章 克氏原螯虾亲环素基因的克隆和结构特征分析 | 第60-79页 |
| 1 引言 | 第60-61页 |
| 2 材料与方法 | 第61-68页 |
| 2.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 2.1.1 克氏原螯虾 | 第61-62页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第62页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第62页 |
| 2.1.4 实验所用引物的设计与合成 | 第62页 |
| 2.2 实验方法 | 第62-68页 |
| 2.2.1 克氏原螯虾CypA基因中间片段的获得 | 第62-64页 |
| 2.2.2 克氏原螯虾CypA基因全长的RACE-PCR扩增 | 第64-68页 |
| 2.2.3 序列分析和系统进化分析 | 第68页 |
| 3 实验结果 | 第68-75页 |
| 3.1 总RNA的浓度和纯度 | 第68页 |
| 3.2 克氏原螯虾CypA全长cDNA序列及推导的氨基酸序列 | 第68-70页 |
| 3.3 不同物种的CypA的氨基酸序列的同源性对比及系统进化分析 | 第70-72页 |
| 3.4 CypA基因的疏水性 | 第72页 |
| 3.5 CypA基因的信号肽 | 第72-73页 |
| 3.7 CypA基因蛋白的功能 | 第73-74页 |
| 3.8 CypA蛋白的二级结构 | 第74页 |
| 3.9 CypA基因的亚细胞定位 | 第74页 |
| 3.10 CypA基因的功能位点 | 第74页 |
| 3.11 CypA蛋白的三级结构预测分析 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-78页 |
| 4.1 克氏原螯虾CypA的结构特征 | 第75-76页 |
| 4.2 克氏原螯虾CypA基因的生物信息学分析 | 第76-77页 |
| 4.3 CypA基因的结构与功能的关系 | 第77-78页 |
| 5 本章小结 | 第78-79页 |
| 第三章 克氏原螯虾群体形态差异与亲环素基因的遗传多样性分析 | 第79-105页 |
| 第一节 克氏原螯虾5种群形态学差异及判别 | 第79-96页 |
| 1 引言 | 第79-80页 |
| 2 材料与方法 | 第80-81页 |
| 2.1 材料 | 第80页 |
| 2.2 数据测量 | 第80页 |
| 2.3 参数选择 | 第80-81页 |
| 2.4 分析方法 | 第81页 |
| 3 结果与分析 | 第81-92页 |
| 3.1 聚类分析 | 第81-85页 |
| 3.2 判别分析 | 第85-89页 |
| 3.2.1 雄性克氏原螯虾形态判别分析 | 第85-87页 |
| 3.2.2 雌性克氏原螯虾形态判别分析 | 第87-89页 |
| 3.3 主成分分析 | 第89-92页 |
| 3.3.1 雄性克氏原螯虾主成分分析 | 第89-91页 |
| 3.3.2 雌性克氏原螯虾主成分分析 | 第91-92页 |
| 4 讨论 | 第92-96页 |
| 4.1 形态差异与种群间亲缘关系 | 第92-94页 |
| 4.2 三种多元分析方法的使用评价 | 第94-96页 |
| 第二节 3个克氏原螯虾地理群体CypA基因的序列差异分析和SNP位点筛查 | 第96-104页 |
| 1 引言 | 第96页 |
| 2 材料与方法 | 第96-98页 |
| 2.1 材料 | 第96-97页 |
| 2.2 方法 | 第97-98页 |
| 2.2.1 基因组DNA的提取 | 第97页 |
| 2.2.2 引物设计及PCR扩增 | 第97-98页 |
| 2.2.3 RNA的提取、RT-PCR及PcCypA基因扩增 | 第98页 |
| 2.2.4 序列分析 | 第98页 |
| 3 实验结果与分析 | 第98-103页 |
| 3.1 CypA基因的基因组PCR扩增结果 | 第98-99页 |
| 3.2 CypA基因的RT-PCR扩增结果 | 第99页 |
| 3.3 基因片段的序列分析 | 第99-103页 |
| 3.3.1 序列变异 | 第99页 |
| 3.3.2 碱基组成和遗传距离 | 第99-100页 |
| 3.3.3 不同群体遗传多样性及遗传分化分析 | 第100-102页 |
| 3.3.4 系统发育 | 第102-103页 |
| 4 讨论 | 第103-104页 |
| 4.1 PcCypA基因序列的SNP位点分析 | 第103页 |
| 4.2 克氏原螯虾的种群遗传多样性 | 第103-104页 |
| 本章小结 | 第104-105页 |
| 第四章 克氏原螯虾亲环素A基因的原核表达和多克隆抗体制备 | 第105-121页 |
| 1 引言 | 第105-106页 |
| 2 材料与方法 | 第106-114页 |
| 2.1 实验材料 | 第106-107页 |
| 2.1.1 克氏原螯虾 | 第107页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第107页 |
| 2.1.3 实验药品及试剂 | 第107页 |
| 2.2 实验方法 | 第107-114页 |
| 2.2.1 寡核昔酸引物设计与合成 | 第107-108页 |
| 2.2.2 表达前的序列分析 | 第108页 |
| 2.2.3 RNA的提取、RT-PCR及PcCypA蛋白基因扩增 | 第108页 |
| 2.2.4 原核表达载体构建 | 第108-111页 |
| 2.2.5 pET30a(+)-PcCypA重组蛋白的原核表达与鉴定 | 第111页 |
| 2.2.6 重组pET30a(+)-PcCypA蛋白表达条件优化 | 第111-112页 |
| 2.2.7 pET30a(+)-PcCypA重组蛋白的纯化和Western blot检测 | 第112页 |
| 2.2.8 多克隆抗体的制备与Western blot检测 | 第112-114页 |
| 3 实验结果 | 第114-117页 |
| 3.1 融合蛋白结构及表达特性预测 | 第114-115页 |
| 3.2 PcCypA目的片段和pMD18-T载体的连接 | 第115页 |
| 3.3 pET30a(+)-PcCypA重组载体构建 | 第115-116页 |
| 3.4 融合蛋白表达效率及存在形式 | 第116-117页 |
| 4 讨论 | 第117-120页 |
| 4.2 IPTG诱导浓度、时间对pET30a(+)-PcCypA原核融合表达量的影响 | 第117-118页 |
| 4.3 CypA蛋白特性分析 | 第118-119页 |
| 4.3.1 CypA重组蛋白的存在形式 | 第118页 |
| 4.3.2 PcCypA蛋白和PcCypA融合蛋白的分子量 | 第118-119页 |
| 4.4 克氏原螯虾CypA多克隆抗体制备 | 第119-120页 |
| 5 本章小结 | 第120-121页 |
| 第五章 CypA基因在克氏原螯虾组织中的转录与表达模式研究 | 第121-130页 |
| 1 引言 | 第121-122页 |
| 2 材料与方法 | 第122-125页 |
| 2.1 实验材料 | 第122页 |
| 2.1.1 克氏原螯虾 | 第122页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第122页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第122页 |
| 2.2 实验方法 | 第122-125页 |
| 2.2.1 克氏原螯虾CypA基因的组织表达模式研究 | 第122-125页 |
| 2.2.2 克氏原螯虾不同组织CypA蛋白表达分析 | 第125页 |
| 2.3 数据统计分析 | 第125页 |
| 3 实验结果 | 第125-128页 |
| 3.1 PcCypA荧光定量检测与分析 | 第125-127页 |
| 3.2 克氏原螯虾不同组织CypA蛋白表达分析 | 第127-128页 |
| 4 讨论 | 第128-129页 |
| 4.1 克氏原螯虾不同组织中CypA的转录表达分析 | 第128-129页 |
| 4.2 CypA基因在克氏原螯虾不同组织中蛋白表达分析 | 第129页 |
| 5 本章小结 | 第129-130页 |
| 第六章 WSSV感染下克氏原螯虾CypA基因的表达响应研究 | 第130-142页 |
| 1 引言 | 第130-131页 |
| 2 实验材料与方法 | 第131页 |
| 2.1 克氏原螯虾 | 第131页 |
| 2.2 人工感染实验 | 第131页 |
| 2.3 组织病理学观察 | 第131页 |
| 2.4 qRT-PCR检测CypA基因的转录表达 | 第131页 |
| 3 结果与分析 | 第131-138页 |
| 3.1 WSSV对克氏原螯虾的感染能力 | 第131-132页 |
| 3.2 WSSV感染克氏原螯虾的组织学研究 | 第132页 |
| 3.3 WSSV感染后克氏原螯虾不同组织的CypA转录的时序表达模式 | 第132-135页 |
| 3.4 WSSV感染后克氏原螯虾CypA基因在不同时间转录的组织空间表达模式 | 第135-138页 |
| 4 讨论 | 第138-140页 |
| 4.1 WSSV对克氏原螯虾的感染效果 | 第138-139页 |
| 4.2 WSSV感染下克氏原螯虾CypA的转录表达特性 | 第139-140页 |
| 4.3 水生生物CypA基因的功能 | 第140页 |
| 5 本章小结 | 第140-142页 |
| 第七章 研究小结、创新点与展望 | 第142-144页 |
| 一、研究小结 | 第142页 |
| 二、创新点 | 第142-143页 |
| 三、展望 | 第143-144页 |
| 参考文献 | 第144-170页 |
| 致谢 | 第170页 |
