| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-11页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 口蹄疫概述 | 第11页 |
| 1.2 FMDV基本结构 | 第11-12页 |
| 1.3 口蹄疫诊断技术研究进展 | 第12-16页 |
| 1.3.1 病原学诊断 | 第12-13页 |
| 1.3.2 血清学诊断 | 第13页 |
| 1.3.3 间接夹心ELISA | 第13-14页 |
| 1.3.4 抗体检测 | 第14页 |
| 1.3.5 RT-PCR技术 | 第14-15页 |
| 1.3.6 新诊断技术研究进展 | 第15页 |
| 1.3.7 区分自然感染动物和免疫动物及理论依据 | 第15-16页 |
| 1.4 免疫胶体金技术及应用 | 第16-18页 |
| 1.4.1 免疫胶体金技术基本原理 | 第16-17页 |
| 1.4.2 免疫胶体金快速诊断技术 | 第17-18页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-35页 |
| 2.1 试验材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 临床样品血清及载体 | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要试剂及材料 | 第21-23页 |
| 2.1.4 溶液及培养基的配制 | 第23-24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-35页 |
| 2.2.1 FMDV融合基因的合成及pET-28a(+)通用引物的合成 | 第24-26页 |
| 2.2.2 原核表达载体的构建 | 第26-28页 |
| 2.2.3 重组表达载体的表达及蛋白的纯化 | 第28-31页 |
| 2.2.4 纯化蛋白的Westernblot鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.5 胶体金免疫层析方法的建立 | 第32-35页 |
| 3 结果 | 第35-46页 |
| 3.1 FMDV3ABCab蛋白DNAstar分析及抗原蛋白和基因筛选结果 | 第35-36页 |
| 3.2 原核表达载体的构建 | 第36-39页 |
| 3.2.1 pET28a-3ABCab质粒的酶切鉴定 | 第36页 |
| 3.2.2 pET-28a(+)空载双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.3 pET28a-3ABCab特异性引物PCR扩增鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2.4 pET28a-3ABCab基因菌液PCR鉴定 | 第38页 |
| 3.2.5 pET28a-3ABCab质粒的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3 融合蛋白的表达及纯化 | 第39-41页 |
| 3.3.1 pET28a-3ABCab阳性菌在不同时间点的表达产物及蛋白可溶性的SDS-PAGE鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3.2 纯化蛋白的SDS-PAGE鉴定结果 | 第40-41页 |
| 3.3.3 纯化蛋白的浓度测定结果 | 第41页 |
| 3.3.4 纯化蛋白的Westernblot鉴定 | 第41页 |
| 3.4 胶体金免疫层析方法的建立 | 第41-46页 |
| 3.4.1 胶体金最适pH值的确定 | 第41-42页 |
| 3.4.2 胶体金最适SPA标记量的确定 | 第42-43页 |
| 3.4.3 最佳喷金量的确定 | 第43页 |
| 3.4.4 T线划线蛋白3ABCab浓度的筛选确定 | 第43页 |
| 3.4.5 检测卡有效性的检验 | 第43页 |
| 3.4.6 检测卡交叉性的检验 | 第43-45页 |
| 3.4.7 田间试验 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录A | 第56-57页 |
| 附录B | 第57-58页 |
| 附录C | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 详细摘要 | 第61-62页 |
