| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-25页 |
| 1.1 研究背景 | 第11-21页 |
| 1.1.1 乳腺癌 | 第11-14页 |
| 1.1.2 p53 | 第14-18页 |
| 1.1.3 二甲双胍 | 第18-21页 |
| 1.2 研究目的 | 第21-22页 |
| 1.3 研究意义 | 第22-25页 |
| 第2章 材料和方法 | 第25-41页 |
| 2.1 材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第25页 |
| 2.1.2 试剂 | 第25-26页 |
| 2.2 主要仪器 | 第26页 |
| 2.3 试剂配制 | 第26-27页 |
| 2.4 细胞培养 | 第27-29页 |
| 2.4.1 细胞株的传代培养 | 第27-28页 |
| 2.4.2 细胞株冻存 | 第28页 |
| 2.4.3 细胞株复苏 | 第28页 |
| 2.4.4 细胞蛋白样品制备 | 第28-29页 |
| 2.4.5 BCA蛋白浓度测定 | 第29页 |
| 2.5 Western Blot | 第29-32页 |
| 2.5.1 电泳样品制备 | 第29页 |
| 2.5.2 电泳 | 第29-31页 |
| 2.5.3 转膜 | 第31页 |
| 2.5.4 抗体结合和显色 | 第31-32页 |
| 2.6 RT-PCR | 第32-35页 |
| 2.6.1 提RNA准备工作 | 第32页 |
| 2.6.2 提取总RNA | 第32-33页 |
| 2.6.3 检测总RNA的浓度和质量 | 第33页 |
| 2.6.4 RNA反转录 | 第33页 |
| 2.6.5 引物设计与合成 | 第33-34页 |
| 2.6.6 RT-PCR反应 | 第34-35页 |
| 2.6.7 PCR结果分析 | 第35页 |
| 2.7 MTT Assay | 第35-36页 |
| 2.7.1 准备细胞 | 第35页 |
| 2.7.2 接种细胞 | 第35页 |
| 2.7.3 MTT | 第35-36页 |
| 2.8 细胞衰老染色 | 第36-37页 |
| 2.8.1 准备细胞 | 第36页 |
| 2.8.2 接种细胞 | 第36页 |
| 2.8.3 细胞染色 | 第36-37页 |
| 2.9 Apoptosis assay | 第37-38页 |
| 2.9.1 准备细胞 | 第37页 |
| 2.9.2 接种细胞 | 第37页 |
| 2.9.3 检测细胞中凋亡蛋白表达量 | 第37-38页 |
| 2.10 瞬时转染 | 第38-40页 |
| 2.10.1 准备细胞 | 第38-39页 |
| 2.10.2 接种细胞 | 第39页 |
| 2.10.3 转染 | 第39页 |
| 2.10.4 接种转染后细胞 | 第39-40页 |
| 2.10.5 MTT鉴定转染后生长抑制曲线差别 | 第40页 |
| 2.11 统计 | 第40-41页 |
| 第3章 结果 | 第41-63页 |
| 3.1 在p53野生型、p53突变型和p53敲除型三种乳腺癌细胞中，二甲双胍所诱导的乳腺癌细胞的生长抑制、细胞衰老及凋亡效应在p53野生型细胞中表现最强 | 第41-44页 |
| 3.1.1 p53的敲除或突变对二甲双胍诱导的乳腺癌细胞生长抑制的影响 | 第41页 |
| 3.1.2 p53的敲除或突变对二甲双胍诱导的乳腺癌细胞衰老的影响 | 第41-43页 |
| 3.1.3 p53的敲除或突变对二甲双胍诱导的乳腺癌细胞凋亡的影响 | 第43-44页 |
| 3.2 Nutlin-3α 能够促进二甲双胍诱导的乳腺癌细胞的生长抑制、细胞衰老和凋亡 | 第44-49页 |
| 3.2.1 Nutlin-3α 能够增强二甲双胍对野生型p53乳腺癌细胞MCF-7 的生长抑制作用，而对于突变型p53乳腺癌细胞MB-231细胞无明显作用 | 第44-45页 |
| 3.2.2 Nutlin-3α 能够增强二甲双胍对p53野生型细胞诱导衰老的作用，而在p53敲除型细胞及p53突变型细胞中无促进效果 | 第45-47页 |
| 3.2.3 Nutlin-3α 能够增强二甲双胍对野生型p53细胞MCF-7 诱导凋亡的作用，而对敲除型p53和突变型p53细胞无明显作用 | 第47页 |
| 3.2.4 在野生型p53乳腺癌细胞中，Nutlin-3α 联合二甲双胍能够显著上调p53信号通路下游p21、bax的表达，而在敲除型p53乳腺癌细胞中无明显作用 | 第47-49页 |
| 3.3 CP/31398能够促进二甲双胍诱导乳腺癌细胞的生长抑制、细胞衰老和凋亡 . 39 | 第49-54页 |
| 3.3.1 CP/31398能够增强二甲双胍对野生型p53乳腺癌细胞MCF-7 和突变型p53乳腺癌细胞MB-231细胞生长抑制作用 | 第49-50页 |
| 3.3.2 CP/31398能够增强二甲双胍对p53野生型细胞和突变型p53乳腺癌细胞MB-231细胞诱导衰老的作用，而在p53敲除型细胞无促进效果 | 第50页 |
| 3.3.3 CP/31398能够增强二甲双胍对野生型p53细胞MCF-7 和突变型p53细胞诱导凋亡的作用，而对敲除型p53无明显作用 | 第50-52页 |
| 3.3.4 在野生型p53和突变型p53乳腺癌细胞中，CP/31398联合二甲双胍能够显著上调p53信号通路下游p21、bax的表达 | 第52-53页 |
| 3.3.5 p53突变型乳腺癌细胞MDA-MB-231重表达野生型p53可使该细胞对二甲双胍重新致敏 | 第53-54页 |
| 3.4 二甲双胍能够上调野生型p53乳腺癌细胞中p53及其下游通路的表达 | 第54-57页 |
| 3.4.1 在蛋白水平，二甲双胍能够上调p53及其下游通路p21、bax的表达 | 第54-55页 |
| 3.4.2 在转录水平二甲双胍能够上调p53下游通路p21、bax mRNA的表达 | 第55-56页 |
| 3.4.3 AMPK-mTOR通路与二甲双胍上调p53蛋白表达相关 | 第56-57页 |
| 3.5 二甲双胍类似物苯乙双胍对上述三种乳腺癌细胞同样具有诱导其生长抑制、衰老和凋亡的作用 | 第57-63页 |
| 3.5.1 苯乙双胍诱导p53野生型、p53敲除型、p53突变型三种乳腺癌细胞的生长抑制作用 | 第57-58页 |
| 3.5.2 苯乙双胍诱导p53野生型、p53敲除型、p53突变型三种乳腺癌细胞的衰老的作用 | 第58-59页 |
| 3.5.3 苯乙双胍诱导p53野生型、p53敲除型、p53突变型三种乳腺癌细胞的凋亡的作用 | 第59-60页 |
| 3.5.4 p53突变型乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞重表达野生型p53后对苯乙双胍的敏感性也有所提升 | 第60-61页 |
| 3.5.5 苯乙双胍对p53野生型和p53敲除型乳腺癌细胞中信号通路的影响 | 第61-63页 |
| 第4章 讨论 | 第63-67页 |
| 4.1 p53保持野生型状态是二甲双胍抗乳腺癌作用的必要条件 | 第63页 |
| 4.2 p53激活剂能够协同二甲双胍的抗乳腺癌作用 | 第63-64页 |
| 4.3 二甲双胍通过激活AMPK和抑制m TOR上调p53的蛋白水平 | 第64页 |
| 4.4 苯乙双胍引起的乳腺癌细胞生长抑制，衰老和凋亡同样需要野生型的p53状态 | 第64-67页 |
| 第5章 结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 缩略语词汇表 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第79页 |
