| 致谢 | 第6-11页 |
| 摘要 | 第11-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第14-33页 |
| 1.1 DNA分枝结构特异性内切酶-1(Flap endonuclease 1,FEN1) | 第14-18页 |
| 1.2 FEN1研究进展 | 第18-30页 |
| 1.2.1 FEN1在DNA复制中的功能研究 | 第18-20页 |
| 1.2.2 FEN1在DNA损伤修复通路中的研究 | 第20-24页 |
| 1.2.3 FEN1在重复序列扩增(Repeat sequence expansions)中的功能研究 | 第24-25页 |
| 1.2.4 FEN1蛋白复合体的研究 | 第25-28页 |
| 1.2.5 FEN1的翻译后修饰及功能调节 | 第28-29页 |
| 1.2.6 FEN1在肿瘤中的研究 | 第29-30页 |
| 1.3 本文的理论依据和研究意义 | 第30-33页 |
| 第二章 FEN1/MutSa复合体在聚合酶α合成错配校正中的功能研究 | 第33-67页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 材料和方法 | 第33-39页 |
| 2.2.1 DNA底物的纯化与制备 | 第33-35页 |
| 2.2.2 细胞核的纯化及其提取物的制备 | 第35页 |
| 2.2.3 核酸酶活性分析 | 第35-36页 |
| 2.2.4 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)和亲和沉淀(Pull down)分析 | 第36-37页 |
| 2.2.5 RNA引物剪切实验 | 第37页 |
| 2.2.6 聚合酶α错配校正实验 | 第37页 |
| 2.2.7 免疫清除(Immunodepletion)hMSH2实验 | 第37页 |
| 2.2.8 A159V点突变转基因小鼠的构建及MEF细胞的培养 | 第37-38页 |
| 2.2.9 酵母菌基因敲除,突变率及突变图谱的分析 | 第38页 |
| 2.2.10 细胞转化实验 | 第38页 |
| 2.2.11 组织病理学分析 | 第38-39页 |
| 2.3 实验结果 | 第39-64页 |
| 2.3.1 冈崎片段成熟过程中存在聚合酶α错配纠正过程 | 第41-46页 |
| 2.3.2 FEN1分枝结构特异性内切酶和外切酶活性的协同作用在α片段错配纠正过程中起重要作用 | 第46-54页 |
| 2.3.3 MSH2与FEN1相互作用并促进α片段错配纠正功能 | 第54-61页 |
| 2.3.4 FEN1/MutSa功能复合体缺陷导致的生物学结果 | 第61-64页 |
| 2.4 本章小结 | 第64-67页 |
| 第三章 细胞周期过程中FEN1翻译后修饰的研究 | 第67-81页 |
| 3.1 引言 | 第67-69页 |
| 3.2 实验材料和方法 | 第69-71页 |
| 3.2.1 细胞周期同步化 | 第69页 |
| 3.2.2 细胞预处理及免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)方法 | 第69-70页 |
| 3.2.3 蛋白表达载体的构建及表达纯化 | 第70页 |
| 3.2.4 亲和沉淀(Pull down)分析 | 第70页 |
| 3.2.5 利用~(14)C标记的甲基化供体SAM对FEN1进行甲基化标记 | 第70-71页 |
| 3.2.6 体外FEN1去甲基化反应 | 第71页 |
| 3.2.7 ~(14)C-meFEN1去甲基化释放含有~(14)C甲醛的计数试验 | 第71页 |
| 3.3 实验结果 | 第71-80页 |
| 3.3.1 JMJD1B对甲基化的FEN1具有去甲基化酶活性 | 第71-75页 |
| 3.3.2 Co-IP技术检测FEN1相互作用蛋白复合体 | 第75-77页 |
| 3.3.3 FEN1翻译后修饰缺陷导致的生物学结果 | 第77-80页 |
| 3.4 本章小结 | 第80-81页 |
| 总结与展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-93页 |
| 附表一 DNA底物设计所用的核苷酸序列 | 第93-94页 |
| 作者简历 | 第94页 |
