| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 插图和附表清单 | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第13-27页 |
| 1.1 胚胎干细胞生物学特性 | 第13-21页 |
| 1.2 羊水来源干细胞生物学特性 | 第21-25页 |
| 1.3 肾脏组织干细胞生物学特性 | 第25-27页 |
| 1.4 本项目研究的目的、意义和研究方法 | 第27页 |
| 2 绵羊类羊水干细胞分离培养系统的筛选 | 第27-37页 |
| 摘要 | 第27-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 活体材料 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂及耗材 | 第28-29页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第29页 |
| 2.1.4 溶液配置 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-31页 |
| 2.2.1 绵羊AFSC的原代培养 | 第30页 |
| 2.2.2 绵羊AFSC以及胎儿肾组织中类AFSC的原代培养的新方法 | 第30页 |
| 2.2.3 AFSC培养体系的筛选 | 第30-31页 |
| 2.2.4 AFSC、类AFSC以及胎儿肾组织干细胞的冷冻保存 | 第31页 |
| 2.2.5 AFSC、类AFSC以及胎儿肾组织干细胞的的解冻和培养 | 第31页 |
| 2.3 结果分析 | 第31-35页 |
| 2.3.1 AFSC和RTSC长特性和形态 | 第31-32页 |
| 2.3.2 胎龄对细胞分离培养条件的影响 | 第32-33页 |
| 2.3.3 AFSC培养体系的筛选 | 第33-34页 |
| 2.3.4 AFSC和胎儿RTSC的冻存及复苏对细胞形态及活性的影响 | 第34页 |
| 2.3.5 AFSC-Ⅰ生长曲线的绘制及细胞群体倍增时间的测定 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-36页 |
| 2.5 结论 | 第36-37页 |
| 3 绵羊羊水干细胞以及肾组织干细胞的多潜能生物学特性 | 第37-50页 |
| 摘要 | 第37-38页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第38-39页 |
| 3.1.1 细胞 | 第38页 |
| 3.1.2 主要试剂与耗材 | 第38页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第38-39页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-44页 |
| 3.2.1 提取AFSC、RTSC TOTAL RNA | 第39-40页 |
| 3.2.2 cDNA合成 | 第40页 |
| 3.2.3 通过PCR方法检测以下基因的表达 | 第40-41页 |
| 3.2.4 REAL TIME PCR检测AFSC、RTSC标志基因的相对表达量 | 第41-42页 |
| 3.2.5 多向分化潜能检测 | 第42-43页 |
| 3.2.6 核型分析 | 第43-44页 |
| 3.3 结果分析 | 第44-47页 |
| 3.3.1 RT-PCR检测结果 | 第44-45页 |
| 3.3.2 REAL TIME PCR检测AFSC-Ⅱ、RTSC-Ⅱ的标志基因相对表达量 | 第45-46页 |
| 3.3.3 AFSC-Ⅰ、AFSC-Ⅱ、多向分化潜能检测结果 | 第46页 |
| 3.3.4 核型分析 | 第46-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-49页 |
| 3.5 结论 | 第49-50页 |
| 4 绵羊转基因标记羊水干细胞以及胎儿肾组织干细胞的分子生物学特性 | 第50-60页 |
| 摘要 | 第50页 |
| 4.1 实验材料 | 第50-52页 |
| 4.1.1 细胞 | 第50页 |
| 4.1.2 主要试剂与耗材 | 第50-51页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第51页 |
| 4.1.4 溶液配制 | 第51-52页 |
| 4.2 试验方法 | 第52-53页 |
| 4.2.1 脂质体法介导的P CMV-DSRED转染绵羊AFSC-Ⅱ、胎儿RTSC-Ⅱ | 第52页 |
| 4.2.2 脂质体法介导的P CMV-DsRED转染AFSC-Ⅱ、胎儿RTSC-Ⅱ瞬时转染效率检测 | 第52页 |
| 4.2.3 转基因标记AFSC-Ⅱ、胎儿RTSC-Ⅱ细胞克隆的体外筛选和扩大培养 | 第52页 |
| 4.2.4 转基因标记AFSC-Ⅱ、胎儿RTSC-Ⅱ类胚体检测 | 第52页 |
| 4.2.5 REAL TIME PCR检测转基因标记AFSC-Ⅱ、胎儿RTSC-Ⅱ标志基因的相对表达量 | 第52-53页 |
| 4.3 结果分析 | 第53-57页 |
| 4.3.1 脂质体法介导的P CMV-DSRED转染绵羊AFSC-Ⅱ、胎儿RTSC-Ⅱ | 第53页 |
| 4.3.2 脂质体法介导的P CMV-DSRED转染AFSC-Ⅱ、胎儿RTSC-Ⅱ瞬时转染效率检测 | 第53-54页 |
| 4.3.3 转基因标记AFSC-Ⅱ、胎儿RTSC-Ⅱ细胞克隆的体外筛选和扩大培养 | 第54-55页 |
| 4.3.4 转基因标记AFSC-Ⅱ、胎儿RTSC-Ⅱ类胚体检测 | 第55页 |
| 4.3.5 REAL TIME PCR检测转基因标记AFSC-Ⅱ、胎儿RTSC-Ⅱ标志基因的相对表达量 | 第55-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-59页 |
| 4.5 结论 | 第59-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-75页 |
| 附录 | 第75-81页 |
| 作者简介 | 第81页 |
