| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1 氨甲酞磷酸合成酶Ⅰ | 第10-15页 |
| 1.1 氨甲酞磷酸合成酶 | 第10页 |
| 1.2 CPS 1在尿素循环中的作用 | 第10-11页 |
| 1.3 CPS1缺失 | 第11-13页 |
| 1.4 CPS的结构、催化和调控 | 第13-14页 |
| 1.5 人源CPS1 | 第14-15页 |
| 2 黄曲霉毒素与肝癌的关系 | 第15-17页 |
| 2.1 黄曲霉毒素 | 第15-16页 |
| 2.2 肝癌 | 第16页 |
| 2.3 黄曲霉毒素在肝癌中的作用 | 第16-17页 |
| 3 蛋白互作 | 第17-19页 |
| 第二章 CPS1表达与AFB_1 | 第19-32页 |
| 1 引言 | 第19页 |
| 2 材料 | 第19-20页 |
| 2.1 动物和细胞 | 第19页 |
| 2.2 试剂与耗材 | 第19-20页 |
| 2.3 仪器 | 第20页 |
| 3 实验方法 | 第20-25页 |
| 3.1 小鼠各组织蛋白的提取 | 第20页 |
| 3.2 细胞复苏 | 第20-21页 |
| 3.3 WST-1测定AFB,对细胞的半致死剂量 | 第21页 |
| 3.4 细胞蛋白的提取 | 第21-22页 |
| 3.5 蛋白浓度测定(BCA法) | 第22页 |
| 3.6 western blot | 第22-23页 |
| 3.7 qRT-PCR | 第23-25页 |
| 4 实验结果 | 第25-30页 |
| 4.1 CPS1的表达情况 | 第25-27页 |
| 4.2 细胞半致死剂量的测定 | 第27页 |
| 4.3 AFB_1下调CPS1的表达 | 第27-29页 |
| 4.4 CPS1表达下调方式的分析 | 第29-30页 |
| 5 讨论 | 第30-32页 |
| 5.1 CPS 1在肝脏中特异表达,并在不同物种中进化保守 | 第30页 |
| 5.2 AFB_1下调CPS1 | 第30-32页 |
| 第三章 CPS1的功能 | 第32-46页 |
| 1 引言 | 第32页 |
| 2 材料 | 第32-33页 |
| 2.1 细胞 | 第32页 |
| 2.2 试剂与耗材 | 第32-33页 |
| 2.3 仪器 | 第33页 |
| 3 实验方法 | 第33-39页 |
| 3.1 细胞总RNA的提取 | 第33页 |
| 3.2 反转录 | 第33-34页 |
| 3.3 构建cps1的过表达载体 | 第34-37页 |
| 3.4 无内毒素质粒的提取 | 第37-38页 |
| 3.5 siRNA的设计 | 第38页 |
| 3.6 细胞转染 | 第38页 |
| 3.7 Western blot | 第38页 |
| 3.8 qRT-PCR | 第38页 |
| 3.9 WST-1细胞活力检测 | 第38-39页 |
| 3.10 Annexin V-FITC细胞凋亡检测 | 第39页 |
| 4 实验结果 | 第39-44页 |
| 4.1 cps1过表达载体的构建 | 第39-41页 |
| 4.2 CPS1过表达和干扰的效率 | 第41-42页 |
| 4.3 CPS1的功能 | 第42-44页 |
| 5 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 CPS 1互作蛋白的筛选 | 第46-57页 |
| 1 引言 | 第46页 |
| 2 材料及仪器 | 第46-47页 |
| 2.1 细胞 | 第46页 |
| 2.2 试剂与耗材 | 第46-47页 |
| 2.3 仪器 | 第47页 |
| 3 实验方法 | 第47-52页 |
| 3.1 免疫共沉淀(CO-IP) | 第47-50页 |
| 3.2 蛋白浓度的测定 | 第50页 |
| 3.3 蛋白胶银染 | 第50-51页 |
| 3.4 蛋白胶内酶切 | 第51页 |
| 3.5 质谱分析 | 第51页 |
| 3.6 Western blot | 第51-52页 |
| 4 实验结果 | 第52-55页 |
| 4.1 抗CPS1抗体特异性的验证 | 第52页 |
| 4.2 CO-IP结果 | 第52-54页 |
| 4.3 已报道和预测的CPS1的互作蛋白 | 第54-55页 |
| 5 讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 互作蛋白的验证 | 第57-65页 |
| 1 引言 | 第57页 |
| 2 材料 | 第57-58页 |
| 2.1 细胞 | 第57页 |
| 2.2 试剂与耗材 | 第57页 |
| 2.3 仪器 | 第57-58页 |
| 3 实验方法 | 第58-59页 |
| 3.1 western blot | 第58页 |
| 3.2 qRT-PCR | 第58页 |
| 3.3 免疫荧光共定位 | 第58-59页 |
| 3.4 细胞转染 | 第59页 |
| 4 实验结果 | 第59-64页 |
| 4.1 AFB_1与CPS1的互作蛋白 | 第59-60页 |
| 4.2 CPS1与互作蛋白的调控互作 | 第60-61页 |
| 4.3 CPS2与互作蛋白的物理互作 | 第61-64页 |
| 5 讨论 | 第64-65页 |
| 总结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 附录一 溶液的配制 | 第72-74页 |
| 附录二 表S1 CPS1互作蛋白的预测 | 第74-77页 |
| 附录三 发表的文章 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |