| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 1 引言 | 第8-13页 |
| 1.1 巴西橡胶树产胶排胶机理的研究 | 第9-10页 |
| 1.2 橡胶树ERF(ETHYLENE-RESPONSIVE TRANSCRIPTION FACTOR)的研究 | 第10页 |
| 1.3 结合DNA的DNAJ蛋白的研究 | 第10-11页 |
| 1.4 B3结构域蛋白的研究 | 第11页 |
| 1.5 GAGA元件结合转录激活子的研究 | 第11-12页 |
| 1.6 植物同源异型域亮氨酸拉链(HD-ZIP)蛋白的研究 | 第12页 |
| 1.7 植物C2H2锌指蛋白的研究 | 第12页 |
| 1.8 本研究的目的意义 | 第12-13页 |
| 2 材料与方法 | 第13-30页 |
| 2.1 植物材料 | 第13-14页 |
| 2.1.1 不同组织的RNA提取所用的材料采集 | 第13页 |
| 2.1.2 乙烯利处理的胶乳材料采集 | 第13页 |
| 2.1.3 伤害处理的胶乳材料及未开割树开割后前八次割胶胶乳材料的采集 | 第13页 |
| 2.1.4 烟草BY2悬浮细胞系(Nicotiana tabacum L.cv Bright Yellow2,BY2) | 第13-14页 |
| 2.2 质粒及菌种 | 第14页 |
| 2.3 生化试剂 | 第14-15页 |
| 2.4 各种核酸的纯化 | 第15页 |
| 2.5 大肠杆菌化学感受态细胞的制备及其转化 | 第15-16页 |
| 2.6 酵母单杂交实验 | 第16-19页 |
| 2.6.1 诱饵载体构建 | 第16页 |
| 2.6.2 诱饵菌株构建 | 第16-17页 |
| 2.6.3 酵母单杂交文库构建 | 第17页 |
| 2.6.4 文库测序及其结果分析 | 第17页 |
| 2.6.5 酵母质粒提取 | 第17-19页 |
| 2.6.6 回转诱饵菌株的阳性克隆鉴定 | 第19页 |
| 2.7 部分转录因子cDNA全长的克隆 | 第19-20页 |
| 2.8 SOLEXA转录组数据库分析转录因子的表达模式 | 第20-21页 |
| 2.9 REAL TIME RT-PCR分析转录因子的表达模式 | 第21-23页 |
| 2.9.1 不同材料的单链cDNA合成 | 第21页 |
| 2.9.2 荧光定量引物设计 | 第21-22页 |
| 2.9.3 标准曲线制作 | 第22-23页 |
| 2.9.4 荧光定量检测各个基因在不同材料中的表达丰度 | 第23页 |
| 2.10 五个乙烯信号途径相关的转录因子的启动子的克隆 | 第23-24页 |
| 2.10.1 本地blast克隆 | 第23-24页 |
| 2.10.2 Adpater-PCR克隆 | 第24页 |
| 2.11 转录因子的功能鉴定 | 第24-30页 |
| 2.11.1 常规酶切连接方法载体构建 | 第24-25页 |
| 2.11.2 Gateway克隆载体构建 | 第25-27页 |
| 2.11.3 转录因子的原核表达 | 第27页 |
| 2.11.4 烟草BY-2悬浮细胞原生质体的制备及转化 | 第27-28页 |
| 2.11.5 转录因子的亚细胞定位检测 | 第28-29页 |
| 2.11.6 转录因子的反式激活检测 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-48页 |
| 3.1 酵母单杂交方法克隆转录因子 | 第30-34页 |
| 3.1.1 酵母Bait菌株的构建 | 第30页 |
| 3.1.2 酵母Bait菌株对Aureobasidin A(AbA)抗性的本底浓度检测 | 第30-31页 |
| 3.1.3 酵母单杂交筛选cDNA文库 | 第31页 |
| 3.1.4 文库测及分析结果 | 第31-32页 |
| 3.1.5 阳性克隆的鉴定 | 第32-34页 |
| 3.2 转录因子的表达模式分析 | 第34-39页 |
| 3.2.1 RNA质量检测 | 第34页 |
| 3.2.2 荧光定量引物特异性及扩增效率检测 | 第34页 |
| 3.2.3 转录因子(TFs)组织特异性表达模式分析 | 第34-36页 |
| 3.2.4 乙烯利处理的对转录因子在胶乳中表达的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.5 不同割胶次数转录因子在胶乳中的表达模式 | 第37-39页 |
| 3.2.6 伤害处理对胶乳中转录因子表达的影响 | 第39页 |
| 3.3 五个乙烯信号途径相关转录因子启动子的克隆 | 第39-40页 |
| 3.4 五个ERF本地BLAST分析 | 第40页 |
| 3.5 转录因子原核表达 | 第40-42页 |
| 3.6 转录因子的亚细胞定位 | 第42-45页 |
| 3.7 转录因子反式激活活性检测 | 第45-48页 |
| 3.7.1 五个HbERFs反式激活检测 | 第45页 |
| 3.7.2 四个HbGABTAs反式激活活性检测 | 第45-46页 |
| 3.7.3 pHbSUT5筛选到的其他转录因子反式激活活性 | 第46-47页 |
| 3.7.4 HbDNAJ反式激活活性反式激活检测 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
