| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第11-27页 |
| 1.1 IGF系统和IGFBP-1 | 第11-22页 |
| 1.1.1 IGF信号系统 | 第11-13页 |
| 1.1.2 IGFBP-1 | 第13-18页 |
| 1.1.3 斑马鱼倍增基因igfbp-1a、igfbp-1b | 第18-22页 |
| 1.2 氨基酸缺乏与IGFBP-1 | 第22-23页 |
| 1.3 模式生物斑马鱼 | 第23-24页 |
| 1.4 TALENs和CRISPR/Cas9两个靶向基因修饰新技术 | 第24-25页 |
| 1.5 立题依据和研究意义 | 第25-27页 |
| 第二章 利用TALENs和Cas9技术构建igfbp-1a和igfbp-1b基因的斑马鱼纯合突变体 | 第27-53页 |
| 2.1 前言 | 第27页 |
| 2.2 材料和方法 | 第27-38页 |
| 2.2.1 实验仪器和设备 | 第27页 |
| 2.2.2 生化试剂 | 第27页 |
| 2.2.3 TALENs介导的igfbp-1a、igfbp-1b定点突变 | 第27-36页 |
| 2.2.4 CRISPR/Cas9介导的igfbp-1a、igfbp-1b定点突变 | 第36-38页 |
| 2.3 实验结果 | 第38-52页 |
| 2.3.1 TALENs介导的igfbp-1a定点突变 | 第38-42页 |
| 2.3.2 TALENs介导的igfbp-1b定点突变 | 第42-44页 |
| 2.3.3 CRISPR/Cas9介导的igfbp-1a定点突变 | 第44-48页 |
| 2.3.4 CRISPR/Cas9介导的igfbp-1b定点突变 | 第48-52页 |
| 2.4 讨论 | 第52-53页 |
| 第三章 igfbp-1a和igfbp-1b在胁迫条件下的表达差异和响应机制的研究 | 第53-71页 |
| 3.1 前言 | 第53-54页 |
| 3.2 材料和方法 | 第54-62页 |
| 3.2.1 斑马鱼的饲养和胚胎的获得 | 第54页 |
| 3.2.2 实验仪器和设备 | 第54页 |
| 3.2.3 生化试剂 | 第54页 |
| 3.2.4 亮氨酸缺陷型培养基的配制 | 第54-55页 |
| 3.2.5 细胞培养 | 第55-56页 |
| 3.2.6 亮氨酸缺乏处理 | 第56页 |
| 3.2.7 噻唑蓝(MTT)细胞活力的测定 | 第56页 |
| 3.2.8 斑马鱼ZF4细胞mRNA提取 | 第56-58页 |
| 3.2.9 瞬时转染 | 第58-60页 |
| 3.2.10 双荧光素酶报告基因检测 | 第60页 |
| 3.2.11 抗体制备 | 第60-61页 |
| 3.2.12 蛋白样品的免疫印记分析 | 第61-62页 |
| 3.2.13 胚胎低氧处理 | 第62页 |
| 3.2.14 数据统计和分析 | 第62页 |
| 3.3 实验结果 | 第62-69页 |
| 3.3.1 斑马鱼igfbp-1a基因含有两个保守的AARE元件 | 第62-63页 |
| 3.3.2 斑马鱼igfbp-1a启动子区的AARE元件对亮氨酸缺乏有响应 | 第63-64页 |
| 3.3.3 ZF4细胞中亮氨酸缺乏对igfbp-1a/1b的mRNA表达没有影响 | 第64-65页 |
| 3.3.4 ZF4细胞中亮氨酸缺乏对igfbp-1a/1b的蛋白表达没有影响 | 第65-68页 |
| 3.3.5 敲除igfbp-1a能够抑制低氧胁迫引起的生长迟缓和发育延迟 | 第68-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-71页 |
| 第四章 总结与展望 | 第71-74页 |
| 4.1 总结 | 第71-72页 |
| 4.2 展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 个人简历 | 第83页 |
| 发表的学术论文 | 第83页 |
