| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-28页 |
| 1.1 研究背景及意义 | 第12-21页 |
| 1.1.1 凝血与止血的分子机理 | 第12-13页 |
| 1.1.2 血管性血友病因子VWF的分子结构 | 第13-15页 |
| 1.1.3 VWF介导血小板内细胞信号传导 | 第15-17页 |
| 1.1.4 血管性血友病的类型 | 第17-21页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第21-23页 |
| 1.2.1 VWF-A1与血小板结合的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.2.2 VWF-A1突变体与血小板相互作用研究进展 | 第22-23页 |
| 1.2.3 流体环境中血小板的激活研究进展 | 第23页 |
| 1.3 本课题研究思路 | 第23-27页 |
| 1.3.1 科学问题的提出 | 第23-24页 |
| 1.3.2 实验设计方案 | 第24-26页 |
| 1.3.3 论文研究主要内容及创新点 | 第26-27页 |
| 1.4 论文结构安排 | 第27-28页 |
| 第二章 VWF-A1突变体R1308L和G1324S的表达及纯化 | 第28-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-33页 |
| 2.1.1 载体与菌株 | 第28-29页 |
| 2.1.2 试剂与耗材 | 第29页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第30-33页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第33-40页 |
| 2.2.1 质粒转化大肠杆菌感受态细胞DH5α | 第33-34页 |
| 2.2.2 质粒的提取与基因测序 | 第34-35页 |
| 2.2.3 目的质粒转化大肠杆菌感受态细胞M15 | 第35页 |
| 2.2.4 目的蛋白的诱导表达 | 第35-37页 |
| 2.2.5 VWF-A1体突变体蛋白纯化 | 第37-38页 |
| 2.2.6 SDS-PAGE鉴定蛋白纯度 | 第38-39页 |
| 2.2.7 Western Blot免疫印迹法鉴定蛋白特异性 | 第39页 |
| 2.2.8 BCA试剂盒测定蛋白浓度 | 第39-40页 |
| 2.3 实验结果 | 第40-46页 |
| 2.3.1 质粒DNA浓度及测序 | 第40-41页 |
| 2.3.2 VWF-A1突变体诱导表达结果 | 第41-42页 |
| 2.3.3 VWF-A1突变体蛋白分离纯化结果 | 第42-45页 |
| 2.3.4 VWF-A1突变体蛋白浓度 | 第45-46页 |
| 2.4 分析讨论 | 第46-47页 |
| 2.5 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 应用流动腔研究VWF-A1突变体R1308L和G1324S对血小板黏附的影响 | 第48-60页 |
| 3.1 实验材料 | 第48-51页 |
| 3.1.1 蛋白分子与血小板 | 第48页 |
| 3.1.2 试剂与耗材 | 第48页 |
| 3.1.3 主要实验仪器 | 第48-51页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第51页 |
| 3.2 实验方法与步骤 | 第51-53页 |
| 3.2.1 孵育蛋白分子 | 第51-52页 |
| 3.2.2 血小板的分离与提取 | 第52页 |
| 3.2.3 野生型VWF-A1及其突变体R1308L、G1324S与血小板的黏附 | 第52-53页 |
| 3.3 实验结果 | 第53-57页 |
| 3.3.1 蛋白分子与血小板特异性粘附 | 第53-54页 |
| 3.3.2 比较VWF-A1突变体与WT-A1介导的血小板黏附 | 第54-57页 |
| 3.4 分析讨论 | 第57-59页 |
| 3.5 本章小结 | 第59-60页 |
| 第四章 血流剪切率下VWF-A1突变体R1308L和G1324S对血小板激活的影响 | 第60-76页 |
| 4.1 实验材料 | 第60-62页 |
| 4.1.1 蛋白分子与血小板 | 第60页 |
| 4.1.2 试剂与耗材 | 第60页 |
| 4.1.3 主要实验仪器 | 第60-61页 |
| 4.1.4 溶液配制 | 第61-62页 |
| 4.2 实验方法与步骤 | 第62-64页 |
| 4.2.1 孵育蛋白分子 | 第62-63页 |
| 4.2.2 血小板溶液的制备 | 第63-64页 |
| 4.2.3 野生型VWF-A1及其突变体R1308L、G1324S介导血小板钙响应 | 第64页 |
| 4.3 实验结果 | 第64-72页 |
| 4.3.1 血小板钙响应参数 | 第64-67页 |
| 4.3.2 血小板的激活比率 | 第67-68页 |
| 4.3.3 血小板的激活时间 | 第68-70页 |
| 4.3.4 血小板的激活的达峰时间及半衰期 | 第70-71页 |
| 4.3.5 血小板的钙响应水平 | 第71-72页 |
| 4.4 分析与讨论 | 第72-74页 |
| 4.5 本章小结 | 第74-76页 |
| 总结与展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 附录 | 第86-88页 |
| VWF-A1突变体R1308L的DNA序列及其突变位置 | 第86页 |
| VWF-A1突变体G1324S的DNA序列及其突变位置 | 第86-88页 |
| 攻读硕士期间取得的研究成果 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 附件 | 第90页 |
