| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章引言 | 第11-16页 |
| 1.1 醇脱氢酶概况 | 第11-13页 |
| 1.1.1 醇脱氢酶的应用 | 第11页 |
| 1.1.2 醇脱氢酶种类，结构及反应机理 | 第11-13页 |
| 1.1.2.1 醇脱氢酶的种类 | 第11-12页 |
| 1.1.2.2 醇脱氢酶结构及反应机理 | 第12-13页 |
| 1.2 乳酸菌中的醇脱氢酶 | 第13-14页 |
| 1.3 本课题的研究意义 | 第14-15页 |
| 1.4 论文研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 Lactobacillus plantarum醇脱氢酶的克隆 | 第16-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-19页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第16页 |
| 2.1.2 引物 | 第16-18页 |
| 2.1.3 主要溶液配制 | 第18页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.5 主要设备 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-25页 |
| 2.2.1 Lactobacillus plantarum醇脱氢酶中间序列的扩增 | 第19-23页 |
| 2.2.1.1 Lactobacillus plantarum基因组DNA的提取 | 第19页 |
| 2.2.1.2 设计兼并引物，PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳分析 | 第19-21页 |
| 2.2.1.3 TA克隆、转化、菌落PCR及测序 | 第21-23页 |
| 2.2.2 hi TAIL-PCR 的方法扩增已知序列旁侧的序列 | 第23-25页 |
| 2.3 实验结果 | 第25-31页 |
| 2.3.1 兼并引物扩增后结果 | 第25-27页 |
| 2.3.2 hiTAIL-PCR扩增 5’端和 3’端的未知序列 | 第27-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 Lactobacillus plantarum醇脱氢酶的重组表达及酶学性质研究 | 第32-52页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 3.1.1 菌株 | 第32页 |
| 3.1.2 引物 | 第32页 |
| 3.1.3 主要溶液配置 | 第32-33页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-40页 |
| 3.2.1 PCR扩增 | 第34-35页 |
| 3.2.2 PCR产物与表达载体的连接 | 第35-36页 |
| 3.2.3 制备感受态细胞 | 第36-37页 |
| 3.2.4 转化 | 第37页 |
| 3.2.5 菌落PCR鉴定与测序 | 第37页 |
| 3.2.6 重组质粒诱导表达 | 第37-38页 |
| 3.2.7 Bradford法测蛋白浓度 | 第38页 |
| 3.2.8 蛋白质纯化 | 第38-39页 |
| 3.2.9 醇脱氢酶活性测定 | 第39-40页 |
| 3.2.10 气相分析 | 第40页 |
| 3.3 实验结果 | 第40-49页 |
| 3.3.1 Lactobacillus plantarum醇脱氢酶与表达载体的连接 | 第40-41页 |
| 3.3.1.1 五种醇脱氢酶基因序列的扩增 | 第40页 |
| 3.3.1.2 将目的片段与表达载体连接 | 第40-41页 |
| 3.3.2 五种醇脱氢酶重组质粒的诱导表达及表达条件优化 | 第41-46页 |
| 3.3.2.1 质粒提取 | 第41-42页 |
| 3.3.2.2 质粒转化和表达条件优化 | 第42-45页 |
| 3.3.2.3 三种醇脱氢酶的纯化 | 第45-46页 |
| 3.3.3 酶活测定结果 | 第46-49页 |
| 3.3.3.1 酶活方法的确定 | 第47页 |
| 3.3.3.2 1a，2a，3s的底物特异性 | 第47-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-52页 |
| 3.4.1 重组质粒的构建和原核表达 | 第49-50页 |
| 3.4.2 1a，2a，3s三种醇脱氢酶的纯化 | 第50-51页 |
| 3.4.3 酶活性测试 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第58-59页 |
