| CONTENTS | 第5-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-20页 |
| 1.1 研究目的与意义 | 第12页 |
| 1.2 文献综述 | 第12-18页 |
| 1.2.1 阿魏酸酯酶的来源 | 第12-13页 |
| 1.2.2 阿魏酸酯酶的制备 | 第13页 |
| 1.2.3 阿魏酸酯酶的分类 | 第13-14页 |
| 1.2.4 阿魏酸酯酶的催化机理及蛋白结构 | 第14-15页 |
| 1.2.5 阿魏酸酯酶与多糖降解酶的协同作用 | 第15-16页 |
| 1.2.6 阿魏酸酯酶的应用 | 第16-18页 |
| 1.3 本论文的主要研究内容 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 菌种与载体 | 第20页 |
| 2.1.2 酶和主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 常用试剂的配制 | 第20-22页 |
| 2.1.4 培养基 | 第22页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-31页 |
| 2.2.1 黑曲霉基因组DNA的提取 | 第23页 |
| 2.2.2 基因克隆 | 第23-26页 |
| 2.2.3 根癌农杆菌介导的黑曲霉的遗传转化 | 第26-27页 |
| 2.2.4 同源重组菌株中潮霉素抗性基因的消除 | 第27-28页 |
| 2.2.5 采用两种方法测定重组菌株酶活 | 第28-30页 |
| 2.2.6 重组菌株分泌蛋白检测 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-52页 |
| 3.1 黑曲霉pSZHG表达载体卡盒的构建 | 第31-42页 |
| 3.1.1 黑曲霉基因组的提取 | 第31页 |
| 3.1.2 黑曲霉糖化酶片段的构建 | 第31-38页 |
| 3.1.3 阿魏酸酯酶黑曲霉表达载体pSZHG-faeA的构建 | 第38-42页 |
| 3.2 农杆菌介导法对黑曲霉的遗传转化 | 第42-45页 |
| 3.2.1 冻融法转化农杆菌 | 第42-43页 |
| 3.2.2 农杆菌与黑曲霉的共培养 | 第43页 |
| 3.2.3 黑曲霉转化子的筛选和鉴定 | 第43-45页 |
| 3.3 黑曲霉同源重组转化子的筛选与鉴定 | 第45页 |
| 3.4 阿魏酸酯酶在重组菌株的表达 | 第45-49页 |
| 3.4.1 利用去淀粉麦麸法测定阿魏酸酯酶活性 | 第45-47页 |
| 3.4.2 利用阿魏酸甲酯法测定阿魏酸酯酶活性 | 第47-49页 |
| 3.5 阿魏酸酯酶在重组菌株的蛋白表达 | 第49-50页 |
| 3.6 阿魏酸酯酶重组菌株蛋白质谱分析 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 4.1 阿魏酸酯酶在黑曲霉中的表达 | 第52页 |
| 4.2 黑曲霉表达系统的安全性 | 第52-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 5.1 黑曲霉表达载体卡盒pSZHG的构建 | 第53页 |
| 5.2 阿魏酸酯酶faeA基因黑曲霉表达载体pSZHG-faeA的构建 | 第53页 |
| 5.3 黑曲霉重组转化子的筛选及同源重组转化子的鉴定 | 第53页 |
| 5.4 阿魏酸酯酶在黑曲霉中的表达 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第60页 |
