| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 中英文对照 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 植物次生代谢物 | 第12-14页 |
| 1.1.1 植物多酚 | 第12-14页 |
| 1.1.1.1 黄酮类 | 第12-13页 |
| 1.1.1.2 单宁 | 第13-14页 |
| 1.2 植物与植食性哺乳动物间的协同进化 | 第14-19页 |
| 1.2.1 单宁对植食性动物取食及生长的影响 | 第15-16页 |
| 1.2.2 动物对单宁的适应对策 | 第16-17页 |
| 1.2.2.1 产生唾液单宁结合蛋白 | 第16-17页 |
| 1.2.2.2 肠道中产生降解单宁的微生物 | 第17页 |
| 1.2.2.3 活化相应的解毒酶类 | 第17页 |
| 1.2.3 羟甲基戊二酸Co-A还原酶 | 第17-18页 |
| 1.2.4 转铁蛋白 | 第18-19页 |
| 1.2.5 抗氧化物酶 | 第19页 |
| 1.3 布氏田鼠 | 第19页 |
| 2 本项目的研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 3 材料与方法 | 第20-39页 |
| 3.1 实验仪器 | 第20-21页 |
| 3.2 主要试剂 | 第21页 |
| 3.3 饲料和试剂配制 | 第21-24页 |
| 3.4 实验方法 | 第24-38页 |
| 3.4.1 实验动物 | 第24页 |
| 3.4.2 唾液及粪便的收集及处理 | 第24页 |
| 3.4.3 肝脏样品的收集 | 第24页 |
| 3.4.4 肝脏酶活力测定 | 第24-25页 |
| 3.4.4.1 肝脏匀浆的制作 | 第24-25页 |
| 3.4.4.2 蛋白浓度测定(Folin-酚法) | 第25页 |
| 3.4.4.3 酶活力测定 | 第25页 |
| 3.4.5 唾液及粪便样品中氨基酸含量的分析 | 第25页 |
| 3.4.6 唾液蛋白SDS-PAGE电泳 | 第25页 |
| 3.4.7 布氏田鼠肝脏HMGCR和TrfcDNA片段的克隆 | 第25-35页 |
| 3.4.7.1 布氏田鼠肝脏总RNA的抽提 | 第25-26页 |
| 3.4.7.2 RNA浓度及完整性检测 | 第26页 |
| 3.4.7.3 RNA反转录及结果鉴定 | 第26-27页 |
| 3.4.7.4 引物设计与合成 | 第27页 |
| 3.4.7.5 HMGCR和Trf扩增及克隆与测序 | 第27-28页 |
| 3.4.7.6 3′RACE和5′RACE扩增布氏田鼠HMGCR基因全长 | 第28-33页 |
| 3.4.7.7 PCR产物的纯化 | 第33-34页 |
| 3.4.7.8 pGM-T克隆 | 第34-35页 |
| 3.4.7.9 序列分析和同源性比较 | 第35页 |
| 3.4.8 实时荧光定量PCR法分析HMGCR和Trf的mRNA表达水平 | 第35-37页 |
| 3.4.8.1 实时荧光定量引物的设计及鉴定 | 第35-36页 |
| 3.4.8.2 基因反应条件的优化 | 第36页 |
| 3.4.8.3 实时荧光定量PCR检测 | 第36-37页 |
| 3.4.9 Western Blot检测蛋白质含量 | 第37-38页 |
| 3.4.9.1 蛋白提取和含量的测定(BCA法) | 第37页 |
| 3.4.9.2 SDS-PAGE电泳 | 第37页 |
| 3.4.9.3 转膜 | 第37页 |
| 3.4.9.4 封闭 | 第37-38页 |
| 3.4.9.5 抗体反应 | 第38页 |
| 3.4.9.6 化学发光,显影,定影 | 第38页 |
| 3.5 数据处理 | 第38-39页 |
| 4 结果与分析 | 第39-60页 |
| 4.1 单宁酸对布氏田鼠取食量及体重变化的影响 | 第39-41页 |
| 4.2 单宁酸对布氏田鼠肝脏抗氧化酶的影响 | 第41-43页 |
| 4.3 单宁酸对布氏田鼠唾液蛋白的影响 | 第43-44页 |
| 4.4 布氏田鼠肝脏HMGCR的克隆 | 第44-49页 |
| 4.4.1 HMGCR扩增及克隆及测序结果 | 第44-46页 |
| 4.4.2 3'RACE PCR扩增结果 | 第46页 |
| 4.4.3 5'RACE PCR扩增结果 | 第46-47页 |
| 4.4.4 布氏田鼠HMGCR的编码序列和氨基酸残基序列 | 第47-49页 |
| 4.4.5 布氏田鼠与其他物种的HMGCR的氨基酸序列比对结果 | 第49页 |
| 4.5. 单宁酸对布氏田鼠肝脏组织中HMGCR表达的影响 | 第49-53页 |
| 4.5.1 布氏田鼠肝脏总RNA的提取 | 第49-50页 |
| 4.5.2 实时荧光定量PCR引物的鉴定 | 第50-51页 |
| 4.5.3 单宁酸对布氏田鼠肝脏HMGCR mRNA表达的影响 | 第51-52页 |
| 4.5.4 单宁酸对布氏田鼠肝脏HMGCR含量的影响 | 第52-53页 |
| 4.6 布氏田鼠肝脏基因TrfcDNA片段的PCR扩增 | 第53-55页 |
| 4.6.1 布氏田鼠肝脏基因TrfcDNA片段的PCR扩增结果及测序结果 | 第53-54页 |
| 4.6.2 布氏田鼠与其他物种的Trf的氨基酸序列比对结果 | 第54-55页 |
| 4.7 单宁酸对布氏田鼠肝脏Trf表达的影响 | 第55-60页 |
| 4.7.1 实时荧光定量PCR引物的鉴定 | 第55-57页 |
| 4.7.2 单宁酸对布氏田鼠肝脏Trf mRNA表达的影响 | 第57-58页 |
| 4.7.3 单宁酸对布氏田鼠肝脏组织中Trf含量的影响 | 第58-60页 |
| 5 讨论 | 第60-62页 |
| 5.1 单宁酸对布氏田鼠摄食量和体重的影响 | 第60页 |
| 5.2 单宁酸对布氏田鼠抗氧化功能的影响 | 第60页 |
| 5.3 单宁酸对布氏田鼠唾液单宁结合蛋白的影响 | 第60-61页 |
| 5.4 布氏田鼠的HMG-CoA还原酶及单宁酸对它的影响 | 第61-62页 |
| 5.5 布氏田鼠肝脏转铁蛋白及单宁酸对它的影响 | 第62页 |
| 6 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 附件 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间论文发表和参加课题情况 | 第76-77页 |
