| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-18页 |
| 1 斑点叉尾鮰的水产养殖 | 第11-12页 |
| 2 鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri) | 第12-13页 |
| 3 鞭毛蛋白 | 第13-16页 |
| 3.1 细菌鞭毛 | 第13-15页 |
| 3.2 鞭毛蛋白 | 第15-16页 |
| 3.3 鞭毛蛋白的研究进展 | 第16页 |
| 4 论文研究的目的及意义 | 第16-18页 |
| 第二章 鲁氏耶尔森氏菌SC09菌株三个鞭毛蛋白FlaA,FlaB和FlaC全基因的克隆及原核表达 | 第18-42页 |
| 1 实验材料 | 第19-22页 |
| 1.1 实验菌株、质粒以及生长条件 | 第19页 |
| 1.2 主要的实验仪器设备 | 第19-20页 |
| 1.3 主要试剂 | 第20页 |
| 1.4 主要培养基及溶液的配置 | 第20-22页 |
| 2 试验方法 | 第22-27页 |
| 2.1 引物设计 | 第22页 |
| 2.2 鲁氏耶尔森氏菌的培养及其基因组DNA的提取 | 第22页 |
| 2.3 鲁氏耶尔森氏菌鞭毛蛋白基因的PCR扩增 | 第22-23页 |
| 2.4 鲁氏耶尔森氏菌鞭毛蛋白基因的T载体克隆 | 第23页 |
| 2.5 鲁氏耶尔森氏菌鞭毛蛋白基因的T载体克隆质粒的鉴定 | 第23-24页 |
| 2.6 生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 2.7 原核表达载体pET-32a(+)-FlaA/FlaB/FlaC的构建和表达 | 第25-26页 |
| 2.8 rFlaA/rFlaB/rFlaC的制备与纯化 | 第26-27页 |
| 2.9 Western-blotting检测rFlaA/rFlaB/rFlaC和rpET32a特异性 | 第27页 |
| 3 实验结果 | 第27-39页 |
| 3.1 FlaA,FlaB和FlaC全基因的扩增、T克隆和鉴定 | 第27-28页 |
| 3.2 鞭毛蛋白基因的核酸序列理化特性分析 | 第28-29页 |
| 3.3 鞭毛蛋白的氨基酸序列理化特性分析 | 第29-31页 |
| 3.4 鞭毛蛋白氨基酸序列的结构域预测分析 | 第31-32页 |
| 3.5 鞭毛蛋白氨基酸序列的多序列比较 | 第32-33页 |
| 3.6 鞭毛蛋白氨基酸序列的系统发育树构建 | 第33页 |
| 3.7 鞭毛蛋白氨基酸序列的信号肽序列预测 | 第33-35页 |
| 3.8 鞭毛蛋白氨基酸序列的跨膜区域预测 | 第35-36页 |
| 3.9 三个鞭毛蛋白原核表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.10 三个鞭毛蛋白重组原核表达载体的诱导表达、纯化及特异性鉴定 | 第37-39页 |
| 4 讨论 | 第39-42页 |
| 第三章 鲁氏耶尔森氏菌SC09菌株三个鞭毛蛋白FlaA, FlaB和FlaC免疫调节作用的比较研究 | 第42-70页 |
| 1 实验材料 | 第43-44页 |
| 1.1 实验菌株及重组蛋白 | 第43页 |
| 1.2 实验动物 | 第43页 |
| 1.3 主要的实验仪器设备 | 第43页 |
| 1.4 主要试剂 | 第43-44页 |
| 1.5 主要培养基及溶液配制 | 第44页 |
| 2 试验方法 | 第44-49页 |
| 2.1 斑点叉尾鮰头肾单核巨噬细胞的分离 | 第44-45页 |
| 2.2 三个重组鞭毛蛋白对斑点叉尾鮰单核巨噬细胞的刺激 | 第45-46页 |
| 2.3 三个重组鞭毛蛋白对健康斑点叉尾鮰的免疫 | 第46页 |
| 2.4 RNA的提取 | 第46页 |
| 2.5 cDNA合成 | 第46-47页 |
| 2.6 荧光定量PCR检测相关基因的表达量 | 第47-49页 |
| 2.7 统计学分析 | 第49页 |
| 3 实验结果 | 第49-67页 |
| 3.1 三个重组鞭毛蛋白对斑点叉尾鮰头肾单核巨噬细胞的时间依赖性免疫调节作用 | 第49-57页 |
| 3.2 三个重组鞭毛蛋白刺激斑点叉尾鮰头肾单核巨噬细胞后的基因表达量的比较 | 第57-60页 |
| 3.3 三个重组鞭毛蛋白免疫斑点叉尾鮰的时间依赖性免疫调节作用 | 第60-63页 |
| 3.4 三个重组鞭毛蛋白免疫斑点叉尾鮰后其头肾的基因表达量的比较 | 第63-67页 |
| 4 讨论 | 第67-70页 |
| 第四章 结论 | 第70-71页 |
| 实验创新点 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第78页 |
