| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-25页 |
| ·超氧化物歧化酶 | 第11-16页 |
| ·SOD的发现与分类 | 第11-13页 |
| ·SOD酶活性和辅因子 | 第13-14页 |
| ·SOD应用研究概况 | 第14-16页 |
| ·SOD在食品上的应用 | 第14页 |
| ·SOD在日化上的应用 | 第14-15页 |
| ·SOD在医药上的应用 | 第15-16页 |
| ·EC-SOD(SOD3) | 第16-19页 |
| ·EC-SOD分布及其分子结构 | 第16-17页 |
| ·EC-SOD的生理学特征 | 第17-18页 |
| ·EC-SOD的病理及药用研究 | 第18-19页 |
| ·MnSOD(SOD2)及其药用价值 | 第19-22页 |
| ·SOD2分子结构 | 第19-20页 |
| ·人Mn-SOD与疾病的关系 | 第20-22页 |
| ·研究内容与意义 | 第22-25页 |
| ·hMn-SOD和hEC-SOD基因的克隆与表达 | 第22-24页 |
| ·课题的主要内容 | 第24-25页 |
| 第二章 一般材料与方法 | 第25-36页 |
| ·仪器与设备 | 第25-26页 |
| ·材料和试剂 | 第26-29页 |
| ·化学试剂 | 第26页 |
| ·生物试剂 | 第26页 |
| ·其他试剂 | 第26-27页 |
| ·缓冲液 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌培养基 | 第28页 |
| ·发酵优化培养基 | 第28页 |
| ·菌株与质粒 | 第28-29页 |
| ·动物细胞和培养用液 | 第29页 |
| ·技术方法 | 第29-36页 |
| ·菌体培养 | 第29页 |
| ·菌种的保藏 | 第29页 |
| ·感受态细胞的制备方法 | 第29页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第29-30页 |
| ·碱法抽提质粒DNA | 第30页 |
| ·试剂盒回收凝胶DNA | 第30-31页 |
| ·PCR扩增目的条带 | 第31页 |
| ·酶切和连接 | 第31页 |
| ·蛋白质的表达 | 第31-32页 |
| ·重组菌的摇瓶表达 | 第31-32页 |
| ·重组菌全自动发酵罐培养 | 第32页 |
| ·菌体破碎 | 第32页 |
| ·目的蛋白表达鉴定 | 第32页 |
| ·Bradford法检测蛋白浓度 | 第32-33页 |
| ·SOD酶活与酶比活的测定 | 第33-34页 |
| ·MTT法测定细胞存活率 | 第34-36页 |
| 第三章 重组质粒的构建 | 第36-42页 |
| 1 前言 | 第36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-40页 |
| ·pET28a-SOD2-SOD3C(SOD2/3)表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·引物设计与PCR扩增 | 第37页 |
| ·SOD2/3杂合酶克隆载体的构建 | 第37-38页 |
| ·表达载体pET28a-SOD2/3的构建 | 第38页 |
| ·pET28a-EGFP-SOD3C表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·pET28a-SOD1-SOD3C表达载体构建 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| ·绿色荧光蛋白 | 第40页 |
| ·SOD2/3杂合酶 | 第40-41页 |
| 5. 小结 | 第41-42页 |
| 第四章 重组蛋白表达优化和发酵研究 | 第42-53页 |
| 1 前言 | 第42页 |
| 2 材料与方法 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-49页 |
| ·rhSOD2/3的表达 | 第43页 |
| ·温度对产酶的影响 | 第43-44页 |
| ·锰离子对rhSOD2/3表达的影响 | 第44-45页 |
| ·诱导时间对rhSOD2/3表达的影响 | 第45-46页 |
| ·IPTG对rhSOD2/3表达的影响 | 第46-47页 |
| ·培养基pH对表达的影响 | 第47-48页 |
| ·rhSOD2/3高密度发酵初步探究 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| ·工程菌的稳定性 | 第49-50页 |
| ·摇瓶条件优化 | 第50页 |
| ·培养基对发酵的影响 | 第50页 |
| ·诱导条件对表达的影响 | 第50-51页 |
| ·溶氧和pH值对蛋白表达的影响 | 第51页 |
| ·补料对重组酶表达的影响 | 第51页 |
| 5 小结 | 第51-53页 |
| 第五章 酶蛋白纯化和体外药理活性研究 | 第53-67页 |
| 1 前言 | 第53页 |
| 2 材料与方法 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-65页 |
| ·Bradford法标准曲线的测定 | 第54-55页 |
| ·超声破碎条件的确定 | 第55-56页 |
| ·SOD2/3杂合酶的变性条件的摸索 | 第56-57页 |
| ·pET28a-EGFP-SOD3C和pET28a-EGFP的纯化 | 第57-58页 |
| ·pET28a-EGFP-SOD3C的纯化 | 第57页 |
| ·pET28a-EGFP的纯化 | 第57-58页 |
| ·pET24a-hSOD2蛋白的表达纯化 | 第58-60页 |
| ·重组蛋白的表达情况 | 第58页 |
| ·rhSOD2重组酶的纯化 | 第58-60页 |
| ·rhSOD2/3杂合酶的纯化 | 第60-63页 |
| ·Ni2+-NTA柱纯化rhSOD2/3 | 第60页 |
| ·肝素柱纯化rhSOD2/3 | 第60-61页 |
| ·DEAE-52离子交换纯化rhSOD2/3 | 第61-63页 |
| ·重组蛋白的药理活性 | 第63-65页 |
| 4 讨论 | 第65-66页 |
| 5 小结 | 第66-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
