| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-25页 |
| ·链霉菌简介 | 第11-13页 |
| ·龟裂链霉菌遗传研究概况 | 第12-13页 |
| ·细菌胞内氧化还原状态研究 | 第13页 |
| ·细菌胞内氧化还原传感器(Redox sensor)的研究 | 第13-24页 |
| ·硫醇氧化还原传感器 | 第13-16页 |
| ·Fe-S簇传感器 | 第16-19页 |
| ·黄素辅因子氧化还原传感器 | 第19-21页 |
| ·醌氧化还原传感器 | 第21-22页 |
| ·吡啶核苷酸 | 第22-24页 |
| ·本课题的研究内容及意义 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-33页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·菌种与质粒 | 第25页 |
| ·培养基配方 | 第25页 |
| ·实验试剂 | 第25-26页 |
| ·引物 | 第26页 |
| ·实验仪器 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-33页 |
| ·分子生物学实验 | 第27-30页 |
| ·菌种的甘油管保存 | 第30页 |
| ·蛋白电泳 | 第30-31页 |
| ·蛋白纯化 | 第31页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第31-32页 |
| ·凝胶阻滞实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA) | 第32-33页 |
| 第三章 龟裂链霉菌(S.rimosus M4018)rex基因与ROP片段的克隆与序列分析 | 第33-44页 |
| ·S.rimosus M4018中rex基因的克隆 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增rex基因 | 第35-36页 |
| ·rex基因连接载体pMD19-T并转化大肠杆菌(E.coli)DH5α | 第36-37页 |
| ·序列分析 | 第37-42页 |
| ·ROP片段的克隆与测序 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第四章 龟裂链霉菌(S.rimosus)M4018Rex蛋白在E.coli中表达与纯化 | 第44-54页 |
| ·pET28a-rex(his-Tag)重组表达质粒的构建 | 第44-46页 |
| ·载体pET28a的线性化 | 第44-45页 |
| ·rex(his-Tag)基因的获得 | 第45页 |
| ·pET28a-rex(his-Tag)的构建和转化 | 第45-46页 |
| ·Sr-Rex蛋白的表达及条件优化 | 第46-50页 |
| ·Sr-Rex蛋白的诱导表达 | 第46页 |
| ·Sr-Rex蛋白表达条件优化 | 第46-50页 |
| ·Sr-Rex蛋白的纯化 | 第50-52页 |
| ·Sr-Rex蛋白的Ni-NTA亲和层析 | 第50-51页 |
| ·DEAE阴离子交换层析 | 第51-52页 |
| ·Sr-Rex蛋白浓度测定 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第五章 龟裂链霉菌(S.rimosus)M4018 Rex蛋白性质及功能分析 | 第54-62页 |
| ·圆二色谱测定Sr-Rex二级结构 | 第55-56页 |
| ·凝胶阻滞分析(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)Sr-Rex:ROP生物学活性 | 第56-61页 |
| ·Sr-Rex能结合其启动子序列 | 第56-57页 |
| ·Sr-Rex蛋白与DNA特异性结合位点的确定 | 第57-58页 |
| ·Sr-Rex蛋白与ROP序列的结合活性 | 第58-59页 |
| ·NADH和NAD~+对Sr-Rex蛋白与ROP序列的结合活性的影响 | 第59-60页 |
| ·Sr-Rex与ROP结合的分子模拟图结果 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 第六章 讨论与结论 | 第62-67页 |
| ·讨论 | 第62-65页 |
| ·来源于链霉菌属中S.coelicolor A3(2)的Rex调节机制 | 第62-63页 |
| ·来源于嗜热菌T-Rex与枯草芽孢杆菌B-Rex的晶体结构特点分析 | 第63-64页 |
| ·来源于S.rimosus M4018中Sr-Rex与已知Rex的比较 | 第64-65页 |
| ·结论 | 第65-66页 |
| ·展望 | 第66-67页 |
| ·Sr-Rex蛋白结构的研究 | 第66页 |
| ·Rex蛋白应用 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
