| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第14-20页 |
| 1.1 心肌梗死(Myocardial Infarction,MI)治疗研究现状 | 第14页 |
| 1.2 Eph/ephrin家族与血管生成 | 第14-16页 |
| 1.2.1 血管生成 | 第14-15页 |
| 1.2.2 Eph/ephrin系统的结构及其信号转导的特殊性 | 第15-16页 |
| 1.2.3 Ephrin-B2的生物功能及其对血管生成的重要性 | 第16页 |
| 1.2.4 Ephrin-B2/EphB4双向信号对血管新生影响的争议 | 第16页 |
| 1.3 ephrin-B2与心梗治疗 | 第16-17页 |
| 1.4 蛋白质组学研究 | 第17-19页 |
| 1.4.1 蛋白质组学研究的必要性 | 第17页 |
| 1.4.2 质谱技术与SILAC标记技术 | 第17-18页 |
| 1.4.3 IPA分析平台 | 第18-19页 |
| 1.5 研究的创新性 | 第19-20页 |
| 第二章 试剂、材料与主要仪器 | 第20-24页 |
| 2.1 试剂和材料 | 第20页 |
| 2.2 生物材料 | 第20页 |
| 2.3 常用试剂配制 | 第20-22页 |
| 2.3.1 细胞培养常用试剂 | 第20-21页 |
| 2.3.2 Western blot试剂配制 | 第21-22页 |
| 2.3.3 蛋白质质谱分析试剂的配制 | 第22页 |
| 2.4 主要仪器 | 第22-24页 |
| 第三章 实验方法 | 第24-38页 |
| 3.1 人脐静脉内皮细胞的分离、培养及鉴定 | 第24-26页 |
| 3.1.1 人脐静脉内皮细胞分离方法 | 第24-25页 |
| 3.1.2 人脐静脉内皮细胞传代培养 | 第25页 |
| 3.1.3 人Ⅷ因子相关抗原检测 | 第25-26页 |
| 3.2 液相色谱质谱联用技术分析ephrin-B2/Fc对HUVECs的蛋白质组学影响 | 第26-31页 |
| 3.2.1 稳定的同位素标记 | 第26页 |
| 3.2.2 蛋白样品的制备(细胞处理,裂解和SDS-PAGE) | 第26-28页 |
| 3.2.3 多肽样品的制备 | 第28-29页 |
| 3.2.4 上机,行液质联用分析 | 第29-30页 |
| 3.2.5 差异蛋白数据处理及生物信息学分析 | 第30-31页 |
| 3.3 绘制内皮细胞生长曲线 | 第31页 |
| 3.4 不同浓度的ephrin-B2/Fc对HUVECs增殖的影响 | 第31-32页 |
| 3.5 Ephrin-B2/Fc对HUVECs细胞周期的影响 | 第32页 |
| 3.6 细胞划痕实验 | 第32-33页 |
| 3.7 Transwell实验 | 第33页 |
| 3.8 Western Blot分析 | 第33-37页 |
| 3.8.1 细胞预处理 | 第33页 |
| 3.8.2 蛋白提取及浓度测定 | 第33-35页 |
| 3.8.3 变性SDS聚丙烯酰胺电泳 | 第35-36页 |
| 3.8.4 转膜、封闭、杂交和显影 | 第36-37页 |
| 3.8.5 操作过程中注意事项 | 第37页 |
| 3.8.6 数据处理 | 第37页 |
| 3.9 统计学分析 | 第37-38页 |
| 第四章 实验结果 | 第38-71页 |
| 4.1 成功提取人脐静脉内皮细胞 | 第38-39页 |
| 4.1.1 形态学观察 | 第38页 |
| 4.1.2 免疫组织化学鉴定结果 | 第38-39页 |
| 4.2 质谱检测ephrin-B2/Fc处理后HUVECs蛋白差异性表达 | 第39-63页 |
| 4.2.1 蛋白质浓度测定 | 第39-40页 |
| 4.2.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白 | 第40页 |
| 4.2.3 生物信息学分析 | 第40-63页 |
| 4.3 内皮细胞生长曲线 | 第63页 |
| 4.4 Ephrin-B2/Fc促进人脐静脉内皮细胞的增殖 | 第63-65页 |
| 4.5 Ephrin-B2/Fc对HUVECs细胞周期的影响 | 第65-66页 |
| 4.6 Ephrin-B2/Fc促进HUECs的迁移 | 第66-68页 |
| 4.7 Western Blot检测增殖迁移相关蛋白表达变化 | 第68-71页 |
| 第五章 讨论 | 第71-79页 |
| 5.1 Ephrin-B2在血管生成过程中发挥重要的作用 | 第71-73页 |
| 5.2 差异蛋白的生物信息学分析 | 第73-77页 |
| 5.2.1 Ephrin-B2主要参与内皮细胞的存活、增殖和迁移等生物功能 | 第73-74页 |
| 5.2.2 Ephrin-B2可能通过Axonal Guidance Signaling/(ActinCytoskeleton Signaling)Signaling by Rho Family GTPases导引内皮细胞生长和迁移的方向 | 第74-75页 |
| 5.2.3 肌动蛋白细胞骨架信号转导(Actin Cytoskeleton Signaling)与血管生成关系密切 | 第75-76页 |
| 5.2.4 Ephrin-B2可能通过PI3k-Akt|ZYX|ACIN发挥抗凋亡效应 | 第76-77页 |
| 5.3 Ephrin-B2上调增殖存活相关蛋白的表达 | 第77页 |
| 5.4 研究的局限性 | 第77-79页 |
| 第六章 结论和展望 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-92页 |
| 英文缩略词表 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 附录 | 第95-114页 |
