| 缩略语表 | 第5-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 文献回顾 | 第17-30页 |
| 一、HCV 的基因组与编码蛋白的功能 | 第17-22页 |
| 二、HCV RNA 的翻译与复制机制 | 第22-25页 |
| 三、HCV 微小基因组的研究 | 第25-27页 |
| 四、NS5B 聚合酶活性评价系统与抑制剂的筛选 | 第27-30页 |
| 第一部分 表达 NS3-5B 蛋白的真核表达质粒构建及 NS5B 聚合酶活性鉴定 | 第30-46页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第30-32页 |
| 1.1 质粒、菌株及细胞株 | 第30页 |
| 1.2 主要试剂 | 第30-31页 |
| 1.3 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-40页 |
| 2.1 引物设计及合成 | 第32页 |
| 2.2 重组质粒 pCMV-NS3-5B-IRES-EGFP 的构建及鉴定 | 第32-36页 |
| 2.3 细胞培养 | 第36页 |
| 2.4 细胞转染及荧光成像观察 | 第36页 |
| 2.5 Western Blot 检测 | 第36-38页 |
| 2.6 细胞转染及萤火虫荧光素酶（FLuc）活性检测 | 第38-39页 |
| 2.7 统计学分析 | 第39-40页 |
| 3 实验结果 | 第40-43页 |
| 3.1 重组质粒 pCMV-NS3-5B-IRES-EGFP 酶切鉴定及序列分析结果 | 第40页 |
| 3.2 pCMV-NS3-5B-IRES-EGFP 转染细胞后荧光成像结果 | 第40-41页 |
| 3.3 HCV 非结构蛋白 NS3-4A 和 NS5B Western Blot 检测结果 | 第41-42页 |
| 3.4 pCMV-NS3-5B-IRES-EGFP 和 pCMV/5UrFI3URz 共转染细胞后 FLuc 活性测定结果 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 第二部分 pcDNA3.1(+)-(-)5UIRrG(-)3U 重组质粒构建及功能鉴定 | 第46-73页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第46-47页 |
| 1.1 质粒、菌株及细胞株 | 第46页 |
| 1.2 主要试剂 | 第46-47页 |
| 1.3 主要仪器 | 第47页 |
| 2 实验方法 | 第47-61页 |
| 2.1 引物的设计及合成 | 第47-48页 |
| 2.2 微小基因组片段(-)5UIRrG(-)3U 的拼接 | 第48-54页 |
| 2.3 重组质粒 pcDNA3.1(+)-(-)5UIRrG(-)3U 的构建及鉴定 | 第54-57页 |
| 2.4 细胞培养 | 第57页 |
| 2.5 细胞转染及荧光成像观察 | 第57-59页 |
| 2.6 细胞转染及 Gaussia 荧光素酶（GLuc）活性检测 | 第59-61页 |
| 2.7 统计学分析 | 第61页 |
| 3 实验结果 | 第61-68页 |
| 3.1 微小基因组(-)5UIRrG(-)3U 构建示意图 | 第61页 |
| 3.2 微小基因组(-)5UIRrG(-)3U 各片段 PCR 扩增结果 | 第61-63页 |
| 3.3 重组质粒 pcDNA3.1(+)-(-)5UIRrG(-)3U 酶切鉴定及序列分析结果 | 第63-64页 |
| 3.4 pcDNA3.1(+)-(-)5UIRrG(-)3U 转染细胞后荧光成像结果 | 第64-65页 |
| 3.5 pCMV-NS3-5B-IRES-EGFP 和 pcDNA3.1(+)-(-)5UIRrG(-)3U 共转染细胞后荧光成像结果 | 第65-66页 |
| 3.6 pCMV-NS3-5B-IRES-EGFP 和 pcDNA3.1(+)-(-)5UIRrG(-)3U 共转染细胞后 GLuc 活性测定结果 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-73页 |
| 小结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-85页 |
| 个人简历和研究成果 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
